Монтаж стен из ГКЛ (гипсокартона) от 290 руб. кв.м. Онлайн калькулятор.
Отделочные работы по поверхности начинаются, как правило, с выравнивания. Подготовить их под малярные работы можно двумя способами: оштукатурить или обшить их листами по металлическому каркасу.
Почему мы выбираем гипсокартон для стен? Потому что, он позволяет значительно быстрее получить ровную поверхность, чем её оштукатурить. Она не деформируется после высыхания, и самое главное – мы уходим от «грязных — мокрых» дорогих работ.
Всем известно, что выровненная «Ротбандом» поверхность должна просохнуть не менее 20-ти дней (по ГоСт-у). За это время, в 100 метровой квартире, можно обшить всё гипсокартоном по кругу.
Тогда как, только, была выполнена облицовка , малярные работы можно производить сразу после этого.
Так же, в образовавшемся зазоре между стеной и каркасом можно проложить все коммуникации. (электрика, вентиляция, сантехника, «слаботочка» и т.
Гипсокартонные плиты подбираются обычно толщиной 12 мм. Эконом вариант это когда каркас выставляется через 600 мм. Такая конструкция облицовывается в одни лист. А если нужен усиленный вариант, то устанавливаем размером ячейки на 400 мм, и обшиваем его в два листа. В варианте с двумя слоями, можно использовать «потолочные» плиты (9,5 мм). Иногда в ячейки закладывается «минвата», для уменьшения гула от удара.
Прочность гипсокартонным стенам даёт металлический профиль, которые надёжно стягиваются между собой гипсокартоном. Но вам нужна дополнительная страховка? Выполняем так: горизонтальные перемычки выставляем так, чтобы край плит крепился к ним. Монтаж листов ГКЛ производится в шахматном порядке, так чтоб швы одного ряда не совпадали со швами другого ряда, это уменьшает шансы появления трещин между листами. Так же прочность и гарантию от трещин дает монтаж в два слоя панелей, которые крепятся со смещением швов.
Ещё для прочности, между гипсовыми плитами, крепят оцинкованный лист металла.
Где устанавливается металлическая ячейка 40/50 обшитые двойными листами? Ответ: в новых новостройках, в домах из дерева, в мансардных этажах (по стропилам) и там где нужны особо прочные выровненные поверхности из дешевых и прочных материалов.
Нужно ещё понимать, что деревянные дома облицовывают не так, как это делается в квартирах. И даже каркасный дом отличается от дома из бруса тем, что брус более подвижный и требует большего внимания к себе. Наш мастер должен хорошенько осмотреть дом, прежде чем решит каким способом нужно обшить и какой металлическую конструкцию для этого нужно собирать.
По стене из гипсокартона, так же своя технология малярных работ. Многие гастарбайтеры их выполняли по бетону, штукатурке и понятия не имеют, что такое гипсокартонные швы. Вам трещины нужны на покрашенной готовой поверхности? Нюансов здесь много, поэтому, звоните по любым вопросам и уточняйте всё, что Вас интересует.
Так же смотрите фото гипсокартонных потолков. Работаем качественно и очень быстро!!!
Напоминаю, мы начнём трудиться без авансов. Оплата по факту. Если объём большой, оплата поэтапная.
Ну и конечно Вы хотите узнать, какова стоимость стены из гипсокартона на с малярными работами (под ключ)? Просто позвоните и мы детально обсудим все что вам бы хотелось узнать.
Ещё вы можете прочитать как посчитать стоимость потолка и цены на установку перегородки из гипсокартона.
Наши посетители загружены информацией. Возникают вопросы? Звоните и уточняйте рабочие моменты и факторы которые влияют на стоимость работ. А их, как Вы заметили, немало…
Облицовка стен гипсокартоном — технология монтажа облицовочных материалов
- Технологии облицовки стен при помощи листов гипсокартона
- Обшивка стены с установкой каркаса
Обрабатывая стены комнаты, вы и закладываете основу её общего дизайна, и делаете помещение комфортнее и безопаснее.
Каким бы хорошим ни был ремонт, при некачественно отделанной или просто неровной поверхности, даже покрытой обоями или штукатуркой, он не будет производить должного эффекта. Поэтому облицовка стен – это важное действие, и необходимо учитывать все его варианты и аспекты.
Самые простые способы – это покраска и оклейка обоями. Обе операции можно легко выполнить своими руками, а материалы стоят недорого и довольно разнообразны. Тем не менее, чтобы такое покрытие смотрелось достойно, для его нанесения нужна абсолютно ровная поверхность. Она редко бывает такой сама по себе, так что, скорее всего, вам так или иначе придётся делать предварительную отделку штукатуркой или ГКЛ, и только потом наверх наносить краску или обои.
В некоторых помещениях имеет значение не только красота и эстетичность покрытия, но и его функциональность, ведь облицовочные материалы для стен должны ещё и стойко переносить повышенную влажность и температуру. В этом плане выгодна керамическая плитка, которую так любят применять в ванных комнатах и кухнях.
Действительно, она почти не пропускает влагу и очень долго сохраняет свой первозданный вид в любых условиях. С другой стороны, укладка плитки – это трудоёмкий процесс, особенно если поверхность стен неровная.
Популярностью пользуются листы ПВХ, которые, хотя и смотрятся довольно однообразно, отлично подходят для оформления офисов. Их крепят на каркас или клей, в зависимости от ровности поверхности. К этой же категории отделочных материалов можно отнести и древесноволокнистые плиты, которые укладывают схожим образом.
В целом, какую бы облицовку вы ни взяли, декоративную или функциональную, скорее всего для её укладки вам придётся выравнивать стену. Это можно сделать при помощи гипсокартона, который может как сам по себе стать отделкой, так и послужить основой для других материалов.
Технологии облицовки стен при помощи листов гипсокартона
Обработать поверхность с использованием ГКЛ можно двумя способами:
- приклеить их прямо к стене;
- установить каркас и нашить листы на него.
Первый вариант экономичнее, потому что не нужны металлические профили, и в целом материалов и усилий понадобится меньше. Второй предполагает больше хлопот, зато даёт очень долговечный и надежный результат.
Чтобы приклеить гипсокартон к поверхности стены, необходимо сначала очистить её от всего лишнего (маслянистых пятен, старой шпаклевки и краски и т.д.) и оценить её ровность с помощью уровня. Если отклонения небольшие, то для крепления листов достаточно будет использовать гипсовую шпаклевку (чаще всего это фугенфюллер). Её наносят на поверхность листа грядами небольшой толщины и закрепляют лист в намеченное заранее место. При этом предварительно производится не только разметка, но и грунтовка поверхности, особенно если это внешняя стена, на которую воздействуют осадки.
Если уровень показывает более серьезные отклонения (до 2 см), то для облицовки стен ГКЛ на них наносится клей – например, Перлфикс.
Его распределяют по периметру и центральной линии листа при помощи мастерка, располагая небольшие кучки на расстоянии 25-30 см друг от друга. В стену предварительно вбивают дюбели и вкручивают в них шурупы таким образом, чтобы все шляпки были на одном уровне (проверить это можно при помощи уровня или натянув обычную нить). Лист с нанесенным клеем прижимается к размеченному для него месту до тех пор, пока он не упрется в шурупы. Таким образом, все листы у вас будут на одном уровне, и стена получится ровной.
Для неровностей больше 4 см есть ещё один способ: нарезаются полосы гипсокартона шириной около 10 см и длиной во всю стену. Они наклеиваются на бетонную поверхность и сохнут необходимое количество времени. После этого по описанному выше плану приклеиваются уже сами листы. Нужно учесть, что в этом случае комната потеряет ещё несколько сантиметров на толщине гипсокартонных полос, зато результат оправдывает себя.
При фиксации ГКЛ важно оставлять под потолком и над полом пространство в 0,5 см, чтобы клей мог быстро высохнуть.
Обшивка стены с установкой каркаса
В этом случае важно постоянно контролировать ровность конструкции, которую вы делаете, поэтому большое значение имеет предварительная разметка. Линия будущей стены и каркаса намечается на полу, и именно там устанавливается первый UD-профиль. Для контроля отклонений можно натянуть нить или шнур. После этого так же, шурупами, крепится потолочный профиль, и затем устанавливаются боковые части, так чтобы у вас получилась рамка по периметру.
Дальше, по технологии облицовки, на стены крепятся несущие профили для гипсокартона. Их располагают с шагом в 60 или 30 см, чтобы можно было удобно крепить листы размером 1200х600.
Чем чаще установлены профили, тем жестче и, в то же время, дороже будет конструкция. К стене они прикрепляются при помощи прямых подвесов: подвес вбивается в стену, а потом ему придают форму буквы «П» и прикручивают к CD-профилям. Не забывайте периодически контролировать ровность каркаса.
После установки всех этих деталей нашиваются листы гипсокартона, которые крепят саморезами к профилям (по краям и в центре) с шагом в 20-30 см. Шляпки саморезов надо утопить в поверхности листов на 0,5-1 мм, чтобы они были на одном уровне с картоном, но не рвали его. Как и в предыдущем случае, последний этап – это финишная отделка: поверхность покрывается шпаклевкой и зачищается после обработки швов между листами.
Как видите, облицовка стен – это не так трудно, как может показаться на первый взгляд. Использовав для этих целей гипсокартон, вы получите ровную красивую поверхность, которую можно красить, оклеивать и т.
д. Может, вы уже делали облицовку и знаете ещё что-то, что нужно для получения хорошего результата? Напишите об этом у нас в комментариях!
Автор статьи
Поделись статьей с друзьями:Выравнивание и обшивка стен гипсокартоном ГКЛ недорого — Стены из гипсокартона
Даже в современных новостройках стены квартир иногда бывают неровными. Причин тому может быть несколько: нарушения технологии строительства, халатность рабочих, или просадка фундамента. Как бы то ни было, со временем, жильцы практически любого дома могут столкнуться с такой проблемой, а если дом относится к разряду старого фонда, искривление стен в связи с движением грунтов становится, увы, практически неизбежным. Естественно, если речь идёт о значительных повреждениях несущих стен и потолков, таких как сквозные трещины, необходимо укрепление фундамента дома и рамках капитального ремонта.
Мы рассмотрим ситуацию, когда повреждения стен незначительны, либо кривизна их изначальна и не связана с повреждениями фундаментов.
Итак, каким образом выровнять кривые стены в помещении, избегая больших денежных затрат и максимально сэкономив время? Можно заказать выравнивание стен с помощью штукатурки, но такое выравнивание относится к разряду «мокрых» работ, требует разведения раствора и как следствие, загрязняет помещение. Но, самое важное, выравнивание штукатуркой не предохранит стену от появления трещин в выровненной поверхности, если грунты продолжат движение. Если вы не знаете, чем именно вызвана деформация стены в квартире, такой способ применять рискованно.Практически беспроигрышный вариант – сухое» выравнивание стен гипсокартоном. Работа с гипсокаротоном – основной профиль наших мастеров. Мы имеем большой опыт работы в сфере монтажа гипсокартонных перегородок, выравнивания гипсокартоном стен и потолков. В любое удобное для вас время мы можем оперативно и качественно выполнить монтаж любых гипсокартонных конструкций, провести звукоизоляцию и теплоизоляцию помещения с помощью минеральной или каменной ваты.
Гипсокартонные листы (ГКЛ) – отличный материал для выравнивания стен в офисе, квартире, складском или торговом помещении. Они закрепляются на металлокаркасе из металлических профилей, зафиксированных не только на самой стене, но также на потолке и на полу. Это позволяет предохранить поверхность от появления трещин в будущем. Кроме того, малый вес конструкции не создаёт опасного давления на перекрытия, что позволяет безопасно выравнивать гипроком как бетонные, так и деревянные стены и потолки даже в старом фонде. Выравнивание потолков позволит спрятать желобки в соединениях между бетонными плитами, либо создать ровную поверхность на основе деревянного потолка.
При выравнивании стен и потолков гипсокартоном площадь жилого помещения практически не сокращается. Гипсокартон отнимает не более 3 см. жилого пространства, и не более 6 см. при использовании утеплителя. А так как гипсокартонные конструкции полые изнутри, по вашему желанию, мы проведём в них электропроводку, коммуникации, уложим утеплитель: минеральную или каменную вату, для обеспечения надёжной теплоизоляции и шумоизоляции (вата поглощает более 90 % посторонних шумов).
Закажите у нас выравнивание стен и потолков гипсокартоном, либо монтаж гипсокартонных перегородок и наслаждайтесь теплом и уютом родного дома в обновлённом, комфортабельном интерьере.Выравнивание стен гипсокартоном без каркаса и с каркасом
Выравнивание стен с помощью листов гипсокартона пользуется популярностью благодаря преимуществам перед классическим методом с использованием стартовой штукатурки. Установка гипсокартона на стену отличается простотой, не требует специальных навыков и может выполняться без специнструмента и в итоге обходится дешевле штукатурных работ, особенно, если у вас деревянные стены.
Какой гипсокартон используют для выравнивания стен
Для выравнивания стен используют гипсокартон толщиной до 15,0 мм.
Для помещений с повышенной влажностью применяется влагостойкий гипсокартон (зеленый). Стеновые поверхности из пиломатериалов обшиваются специальным огнестойким гипсокартоном (красный или оранжевый), не поддерживающим горение. Изделия окрашиваются в разный цвет для лучшей идентификации. Обычно для стеновых поверхностей выбираются листы толщиной 12,5 мм.
Варианты фиксации ГКЛ к стене
Перед установкой листов гипсокартона необходимо демонтировать обои и другие отделочные материалы. Стена должна быть очищена от старой штукатурки. Электропроводка укладывается в подготовленные штробы. При наличии труб отопления или водопровода они обводятся благодаря поперечинам каркаса. Количество листов гипсокартона рассчитывается, исходя из размеров стены. Для этого площадь стены поверхности необходимо разделить на площадь одного листа. В результате получается количество ГКЛ с запасом, необходимых для обшивки поверхности.
Для обшивки стен гипсокартоном применяется каркасный и бескаркасный метод крепления ГКЛ с использованием специального клеевого состава. Также эти способы могут комбинироваться. Каркас формируется с помощью направляющих, вертикальных и горизонтальных профилей из металла. Для усиления конструкции используются дополнительные перемычки. Преимущество такого способа в прочности, надежности и возможности выдерживать большие нагрузки при использовании специальных вставок из бруса.
При обшивке листами, швы затираются гипсовой штукатуркой и накладывается армирующая лента, которую можно прикатать валиком или вдавить шпателем. Затем поверхность покрывается грунтовкой и наносится тонкий слой финишной шпатлевки. После высыхания плоскость полируется шкуркой для финишной отделки обоями или покраской.
Особенности обшивки стены профилем
Монтаж гипсокартона на стену каркасным способом выполняется с помощью специальных профилей для гипсокартона.
Работа организуется в несколько этапов:
- подготовка стены, а также прокладка коммуникаций;
- точное измерение неровностей стены и выполнение разметки;
- монтаж каркаса из профилей для гипсокартона;
- фиксация листов;
- заделка стыков и швов.
Метод крепления гипсокартона на каркасы используется для бетонных, кирпичных и блочных стен, отличающиеся большими неровностями. Для обшивки стен гипсокартоном в деревянном доме оптимальным вариантом также будет каркасная технология. Профилированные элементы закрепляются с помощью саморезов и дюбелей. Между собой изделия соединяются муфтами, «крабами» и фиксируются шурупами.
Перед отделкой деревянных стен гипсокартоном, выполняется вертикальная контробрешетка из бруса. Каркас из стеновых и направляющих металлических профилей используется по схеме, как и для стен из другого стройматериала. Крепятся элементы к древесине с помощью саморезов с планшайбами.
Бескаркасная фиксация ГКЛ
Монтаж гипсокартона на стену без профиля (каркаса) возможен при минимальных неровностях стеновой поверхности и предусматривает фиксацию листов с помощью клея.
Преимущества метода в простоте и низкой стоимости. При установке листов с использованием клея, который наносится на стену зубчатым шпателем, должны быть устранены глубокие трещины, выпуклости и прочие неровности более 2 мм. Если имеют место небольшие дефекты, то на лист наносят участки клея (10 см) в шахматном порядке, и он прочно прижимается к стене.
Когда есть большие трещины и другие дефекты, на поверхность наклеиваются полосы из листов гипсокартона с маяками. В процессе монтажа должен обеспечиваться непрерывный контроль уровня по маякам с помощью правила и по вертикали пузырьковым уровнем. Очень важным моментом является то, что плиту гипсокартона можно только надавливать, так как при оттягивании она может сломаться.
Стоимость выравнивания стен гипсокартоном, облицовка стен гипсокартоном
Монтаж гипсокартона на стены в разы ускоряет и упрощает ремонт. ГКЛ в отличии от строительных смесей не требует долгого времени высыхания и после работы с ним остается значительно меньше грязи.
Дополнительный плюс – удобство. Например, с помощью гипсокартонных листов можно очень быстро выровнять углы помещения под 90 градусов, не используя для этого огромного количества материалов. Это особенно важно в старых домах, где с годами несоответствие размеров может измеряться десятками сантиметров.
Для квартир немаловажны звукоизоляционные свойства ГКЛ, а также упрощение прокладки скрытых коммуникаций (электропроводки или водопровода). Если стены выровнены при помощи гипсокартона, не потребуется штробление, которое всегда связано с большим количеством пыли и строительного мусора, плюс, отнимает много времени и средств.
Наконец, гипсокартон открывает поистине безграничные возможности для фантазии дизайнера. Ниши, декоративные выступы и другие интерьерные элементы – с ГКЛ всего этого можно добиться быстро, и не потратив лишних средств.
Стоимость работ
| № | Вид работы | Ед. изм. |
Стоимость за ед. | |
| 1 | Обшивка стен в два слоя (каркас 400мм) | м2 | 700 | |
| 2 | Устройство ниш, полок из ГКЛ | шт | от 1500 | |
| 3 | Стандартный прямолинейный короб Г-образный | п/м | 700 | |
| 4 | Стандартный прямолинейный короб П-образный | п/м | 900 | |
| 5 | Короб со встроенной скрытой подсветкой (обычный выпуск в 2 слоя ГКЛ) | п/м | 1000 | |
| 6 | Короб со встроенной скрытой подсветкой (с бортиком) | п/м | 1200 | |
| 7 | Ниша для линейного светильника | п/м | 600 | |
| 8 | Монтаж встроеного линейного трека | п/м | 900 | |
| 9 | Шумоизоляция минватой | м2 |
150 |
|
| 10 | Монтаж ТЗИ (при монтаже ГКЛ) | м2 | 250 | |
| 11 | Закладные из фанеры/ алюминиевого бруска (в каркасе, для грузов не более 10 кг) | шт или п/м или м2 | 600 | |
| 12 | Независимые закладные из фанеры/ алюминиевого бруска (в каркасе, для грузов более 10 кг) | шт или п/м или м2 | 1500 | |
| 13 | Установка скрытого люка | шт | 1500 | |
| 14 | Вывод вент каналов (прямоугольных с выравниванием по каркасу) | шт | 500 | |
| 15 | Устройство откосов из ГКЛ | п/м | 700 | |
| 16 | Обшивка инсталяции с люком | шт | от 2500 | |
| 17 | Лекальные конструкции (криволинейные) | +30% | ||
| Другие работы | ||||
| 18 | Малярные работы по гипсокартону | м2 | от 600 | |
| 19 | Укладка ламината, паркетной доски | м2 | от 500 | |
| 20 | Плиточные работы | м2 | от 1200 | |
| 21 | Монтаж плинтусов (пластик) | м2 | от 150 | |
| 22 | Разводка розеток, освещения | шт | от 350 | |
| 23 | Комплексный ремонт | шт | от 10000 | |
- Если высота потолков более 3 метров, то цена увеличивается на 100 руб/м2 на каждый метр, превышающий 3 метра высоты.
- Расчет произведен на площадь 100м2.
- При большом объеме предоставляем скидки. Звоните!
- Минимальный заказ от 50 кв.м (сложные конструкции), от 100 кв.м. (прямые).
Облицовка стен ГКЛ
Монтаж гипсокартона на стену может происходить несколькими способами. Самый распространенный и надежный – использование металлических профилей.
Создаем каркас
Сразу оговоримся. На рынке присутствуют множество вариантов профиля, но обратите внимание на то, что их качество зачастую существенно разнится. Цена зависит в первую очередь от толщины и состава стали, а также от слоя защитного антикоррозийного покрытия. Если Вы хотите, чтобы стеновая конструкция прослужила как можно дольше, старайтесь не экономить на качестве профиля. Но если решили таки сэкономить покупайте профиль толщиной не менее 0,4 это обойдется вам дешевле «брендовых», а по качеству будет намного лучше китайских подделок.
Монтаж стен из гипсокартона начинается из создания каркаса на основе металлических профилей. Для этого на потолке и полу крепятся направляющие планки (UD) при помощи дюбель-гвоздей, забитых в заранее приготовленные отверстия. Таким образом направляющие фактически повторят контуры комнаты и к ним теперь можно крепить профили СD, которые при правильной разметке займут строго вертикальное положение.
Профили СD, в зависимости от тяжести конструкции, располагаются друг от друга на расстоянии от 40 до 60 см. Далее посредством прямых подвесов и дюбель-гвоздей каждый профиль прочно прикрепляется к стене. Таким образом, мы получим жесткий каркас к которому, собственно, и будет крепиться гипсокартон.
Монтируем гипсокартонные листы
Перед тем, как приступить к монтажу самого гипсокартона, необходимо определить места розеток и выключателей, а также сделать разводку проводов. Точки, где планируется установить выключатель, пометьте на стене.
Позже напротив них будут сделаны вырезы в ГКЛ. Ни в коем случае не прокладывайте провода внутри профиля, так как в будущем сюда будут закручиваться шурупы.
Гипсокартонные листы прикручиваются саморезами так, чтобы, с одной стороны, сильно не «утопить» их внутрь листа, а с другой – чтобы их шляпки не выступали за пределы картона. В противном случае со временем ржавчина от шурупа проявится на поверхности стены. Обычно шляпка уходит в толщу листа на 1мм.
Стыки между листами, укрепляются серпянкой или армирующей бумажной лентой и покрываются шпаклевкой. После высыхания шпаклевка наносится тонким слоем на всю стену, предварительно прогрунтованную.
Слой строительной смеси необходим для того, чтобы стены из гипсокартона можно было покрасить или оклеить обоями. При замене обоев шпаклевка не даст повредить слой картона на самом листе и после её высыхания можно приступать к отделочным работам. Монтаж стены из гипсокартона завершен.
В статье мы обозначили лишь основные моменты выравнивания стен. У наших специалистов на отделку гипсокартоном средней комнаты уходит всего пару дней, в то время как человеку без опыта на это могут понадобиться недели. Кроме того, существует масса нюансов, несоблюдение которых, часто приводит к порче материала и необходимости постоянно возвращаться к предыдущим этапам, переделывая уже, казалось бы, завершенную работу. Будьте внимательны!
Наши услуги
Если потребуется, выравниванием стен в Вашем жилище займутся наши мастера Многолетний опыт каждого из них – это гарантия того, что стены станут идеально ровными и получат новую жизнь на долгие, долгие годы. Мы никогда не спешим, ни гонимся за количеством заказов, а относимся к каждому объекту как своему детищу, заботясь, чтобы любая деталь стала безупречной.
Это касается не только выравнивания стен. Перегородки из гипсокартона, потолки из гипсокартона и натяжные потолки – любую задачу специалисты компании выполняют добросовестно и на высшем технологическом уровне. Плюс мы можем вам обеспечить безукоризненную шумоизоляциюзоляцию, а также полный объем электромонтажных услуг — от прокладки проводки и установки выключателей с розетками до устройства потолочного и стенового освещения. Для нас нет невыполнимых задач.
При необходимости, мы полностью освободим Вас от хлопот по ремонту, предоставив все необходимые материалы.
На нашем складе только качественные металлопрофили, гипсокартон и все, что потребуется для строительных работ.
Заказать услуги специалиста можно, либо заполнив форму на сайте, либо позвонив по телефону.
| ||||||||
html» tppabs=»http://knaufregion1.narod.ru/fott/099.gif»>
Поверхность облицовки предполагает последующую декоративную отделку, например, окраску, оклейку обоями т.п. Вес 1 кв. м – около 15 (26) кг Минимальная высота облицовки – около 45 (58) мм Высота облицовочных стен – до 10 м
Вес 1 кв. м – около 16 (27) кг Минимальная высота облицовки – 3,0 – 5,0 м Толщина перегородки: 75 – 125 ммОблицовка стен ГКЛ по металлическому каркасу: особенности и правила монтажа
Облицовка стен ГКЛ по металлическому каркасу является наиболее чистым способом выровнять кривые стены дома, а также создать уникальный интерьер по собственному проекту.
Установка гипсокартона позволяет выровнять стены любой сложности, а так же утеплить и звукоизолировать комнату.
Кроме очевидных эстетических преимуществ использования гипсокартона в качестве отделочного материала, именно каркасный способ монтажа с применением металлического профиля дает возможность провести качественное утепление помещения, скрыть линии коммуникаций, звукоизолировать комнаты.
Чтобы правильно и качественно провести облицовку стен гипсокартоном по металлическому каркасу необходимо следовать инструкции и выполнять все работы в определенной последовательности. Главным правилом при выполнении этого вида отделки является постоянный контроль уровня и плоскости.
Необходимые материалы
Для монтажа гипсокартона на металлический каркас нужно купить:
- ГКЛ стеновой толщиной не менее 12 мм (если работы планируется проводить в помещениях с высокой влажностью, лучше взять влагостойкий ГКЛ).
- Профили CD (к ним крепятся листы гипсокартона) и UD (в качестве направляющих по периметру).
- Крепления для бетонных или кирпичных стен – дюбель-гвозди «грибок», самый оптимальный размер – 6×60 мм.
- Подвесы стеновые оцинкованные (иначе их называют «скобами»).
- Соединительные элементы для профилей типа «краб».
- Саморезы для соединения профилей – «блошки», они также оцинкованные.
- Каленые черные саморезы по металлу длиной 25 мм для крепления гипсокартона.
- Материал для теплоизоляции (минеральная вата, пенопласт, пенополистирольные плиты,
паробарьер и другие изоляционные средства). - Грунтовка глубокого проникновения.
Необходимый инструмент
Облицовка стен гипсокартоном по металлическому каркасу невозможна без специального оборудования. Если вы хотите зашить ГКЛ всего одну стену в комнате, то это займет совсем мало времени, поэтому инструмент можно взять напрокат или занять у соседей.
Вам понадобятся:
- Перфоратор с буром диаметром, который соответствует диаметру и длине дюбелей, можно использовать дрель с ударным механизмом.
- Шуруповерт с крестовой битой.
- Строительный уровень длиной минимум 60 см.
- Рулетка.
- Правило.
- Отвес.
- Карандаш или маркер, маркировочная нить.
- Стремянка или строительные леса.
- Молоток, отвертка, строительный нож и набор сменных лезвий.
- Ножницы по металлу – необходимы для отрезания профиля нужной длины.
- Толстая прочная длинная нить.
Порядок выполнения работ
Рассмотрим наиболее простой способ облицовки стен ГКЛ по металлическому каркасу. Предположим, что необходимо выровнять стену в комнате. Это значит, что нужно создать идеально вертикальную и ровную во всех плоскостях поверхность. Работа будет состоять из таких этапов:
- Измерение имеющихся дефектов поверхности и определение необходимого количества материала.
- Разметка места крепления каркаса для гипсокартона.
- Монтаж подвесов и металлических профилей.
- Укладка изоляционных материалов (по желанию).
- Обшивка каркаса гипсокартоном.
Этап 1. Определение кривизны поверхности
Используем уровень, правило и рулетку. Определяем наличие вертикали и прямых углов как по сторонам, так у потолка и пола. На этом этапе стоит учитывать необходимость устройства вентиляции, укладки проводки и прочие подготовительные работы с коммуникациями.
Каркасная конструкция существенно забирает полезную площадь помещения, поэтому чем более точные расчеты будут произведены, тем более оптимально будет использовано пространство.
Этап 2. Разметка
Используем рулетку, карандаш, маркировочную нить и уровень для определения расположения каркаса конструкции. Первым отмечаем место у стены, где возможно сделать минимальное отступление. Самое маленькое расстояние, которое можно отложить, – 3 см (ширина направляющего профиля UD). Однако следует помнить о необходимости размещения проводки и прочих коммуникаций за профилями и листами гипсокартона.
На первых этапах работы вам необходимо провести разметку, для этого понадобится маркировочная нить и уровень.
- Отмечаем вертикальную линию на стене, смежную с той, где будет монтироваться гипсокартон. Ту же операцию проделываем со стеной напротив, не забывая проверять вертикальный уровень.
- Соединив маркировочной нитью две верхние точки боковых направляющих, отмечаем на потолке линию.
- При помощи отвеса отмечаем насколько точек на полу и проверяем правильность разметки, приложив маркировочную нить к нижним точкам боковых направляющих. Если все сходится, отбиваем нитью линию на полу. На этом этапе стоит проверить нитью, во всех ли точках достаточно места для установки профилей.
- Далее через каждые 60 см на стене нужно провести вертикальные линии (ширина листа гипсокартона – 120 см, поэтому точная разметка очень важна). По ним будут выставляться несущие профили. Если в стене есть дверной проем, отмечаем дополнительные линии по его краям.
- В том случае, если стена расположена в коридоре или детской, рекомендуется укрепить конструкцию дополнительными горизонтальными перемычками, которые лучше всего установить на высоте колен, бедер, локтей. Для этого отмечаем на нужной высоте горизонтальные линии.
Для этого отмечаем на нужной высоте горизонтальные линии.Перед монтажом ГКЛ производится укладка теплоизоляции, электрики и других коммуникаций.
Этап 3. Монтаж каркаса
Основным требованием при создании металлического каркаса для гипсокартона является четкий контроль расстояний, размеров и уровня.
Если вся разметка была выполнена верно, то процесс установки каркаса должен пройти без проблем.
- По начерченным по периметру линиям устанавливаем направляющие профили UD. Для этого насквозь через профиль просверливаем буром отверстие в стене с достаточной для дюбеля глубиной. Вставляем пластиковый чопик до упора и забиваем гвоздь дюбеля молотком. Если на стене есть дверной проем, направляющий профиль укладывается до его границ.
- По вертикальным линиям для несущих профилей необходимо сделать отметки через 60 – 70 см. По ним монтируются крепления-«скобы». Таким образом, для стены высотой 2,5 м нужно три таких крепления на один профиль CD – на высоте 65 см, 125 см, 190 см. У дверного проема для закрепления несущего профиля вместо перфорированной скобы для крепления используется Г-образный крепеж. Его можно самостоятельно изготовить из обрезка UD.
- Когда скобы закреплены, в каркас вставляются несущие профили CD, вырезанные точно по размеру. Они должны свободно войти в UD сверху и снизу. Необходимо создать идеально ровную плоскость и правильно закрепить все вертикальные элементы. Для этого вкрутите в боковые направляющие саморезы и натяните по ним горизонтально плотную нить. Она будет своеобразным маркером для профилей CD.
- Выставляя по шнуру профили, следует скрепить каждый из них со скобами. Для создания горизонтальной обрешетки повторяем процедуру с креплением скоб по отмеченным горизонтально линиям. В местах пересечения устанавливаются крепления-«крабы» и монтируются дополнительные перемычки.
У дверного проема для закрепления несущего профиля вместо перфорированной скобы для крепления используется Г-образный крепеж. Его можно самостоятельно изготовить из обрезка UD.Этап 4. Монтаж ГКЛ
Обшивка стен ГКЛ по металлическому каркасу начинается с целых листов. Нельзя допускать крестообразной стыковки швов.
Целые листы и более мелкие части монтируются в шахматном порядке. Каждая резаная часть гипсокартона должна опираться минимум на 2 профиля, а целые листы – на 3. Все края листов должны ложиться на профиль. Поэтому следует устанавливать дополнительные перемычки под каждый стык, где нет основного профиля.
Прокручивать листы ГКЛ следует в таком порядке:
- Несколько саморезов по периметру для фиксации.
- 2 – 3 штуки – по центральному профилю.
- После этого ГКЛ прикручивается саморезами с шагом 15 – 20 см по периметру листа и 25 – 35 – по центру.
После монтажа одной стены те же операции повторяют на других поверхностях. Придерживаясь несложных правил монтажа ГКЛ по металлическому каркасу, выровнять и утеплить стены в доме своими руками может каждый.
Идентификация потенциальных мишеней для дифференцировки клеток лейкемии человека, индуцированной диаллилдисульфидом
Введение
Острый миелоидный лейкоз (ОМЛ), злокачественная и
агрессивное новообразование, не чувствительное к химиотерапии.
AML — это
самый распространенный острый лейкоз у взрослых, и его заболеваемость составляет
3–4 / 100 000 в год (1). Несмотря на то что
большинство пациентов с стандартной индукционной химиотерапией могут достичь
полная ремиссия, частота рецидивов по-прежнему высока и многое другое
более половины пациентов умирают от болезни (2).Медицинское сообщество продолжает
добиться прогресса в молекулярных сигнальных путях ОМЛ, однако,
до сих пор не было показано значительного улучшения лечения.
Помимо способности к пролиферации клеток и
устойчивость к апоптозу, недифференцированное состояние характерно для
большинство раковых клеток, особенно лейкозных клеток. Дифференциация клеток
имеет много аспектов в сложных регуляторных сетях, в том числе
транскрипционная, посттранскрипционная и эпигенетическая регуляция
экспрессия гена.Клон-специфические гены и рост клеток и
гены, связанные со смертью, участвуют в процессе созревания. К
индуцировать дифференцировку раковых клеток рассматривается как альтернатива
метод, ведущий к гибели клеток и ингибированию пролиферации.
Дифференцирующая терапия в основном использовалась для лечения
ОМЛ, особенно с полностью транс-ретиноевой кислотой (ATRA)
(3). Второй клинически полезный
Возбудителем ОМЛ является триоксид мышьяка (АТО) (4). Несмотря на выдающийся успех
Лечение ATRA, у большого количества пациентов были рецидивы на
учет сопротивления ATRA (5).Синдром ретиноевой кислоты — относительно частое и серьезное заболевание.
осложнение, которое может возникнуть у пациентов с острым промиелоцитарным лейкозом
после лечения ATRA и / или ATO (6). Хотя широко распространенный миелоид
описаны соединения, индуцирующие дифференцировку, в том числе
алкалоиды, флавоноиды и полифенолы, но их клиническая эффективность
в лечении ОМЛ еще предстоит изучить
(3,7). Следовательно, необходимо найти
многообещающие индукционные соединения, относительно нетоксичные и
эффективен и может использоваться в клинических целях.
Диаллилдисульфид (DADS) — это сераорганическое соединение.
соединение из растений лука, таких как чеснок. У DADS были противоопухолевые
роль в различных опухолях (8),
и был признан нетоксичным in vivo в соответствии с
экспериментальные данные (9). Следовательно,
как признанный противораковый агент, подавляющий рост раковых клеток
и инвазии, DADS имеет хорошие перспективы для адъювантной терапии в
клиническое применение.
Ранее мы показали, что умеренное количество DADS
(15–120 мкМ) может заметно подавлять рост AML человека.
Клетки HL-60 (10), индуцируют
апоптоз (11) и остановка G2 / M
(12).В этом исследовании мы обнаружили
что 8 мкМ DADS индуцировали дифференцировку клеток HL-60 в
vitro и in vivo эксперименты. Исходя из этого, используя высокие
разрешающей масс-спектрометрии, мы проводим скрининг и получаем молекулы
показывающий статистически различную экспрессию между DADS-леченными
и необработанные клетки. Было идентифицировано 18 белков, в том числе
четыре протеина с повышенной и 14 пониженной регуляции. Открытие
эти молекулы способствуют выявлению неизвестных антилейкозов.
механизмы DADS как потенциального дифференцирующего агента.
Материалы и методы
Культура клеток и пролиферация клеток проба
Клеточная линия лейкемии человека HL-60 была получена от Cancer Научно-исследовательский институт, Медицинский колледж Сянъя, Южный центр Университет в Китае. Клетки культивировали в среде RPMI-1640 с 10% фетальная бычья сыворотка (FBS), 100 мкг / мл стрептомицина и 100 Ед / мл пенициллина G во влажной атмосфере 5% CO2 и 95% воздуха при 37 ° C.
клеток (3 × 104) засевали в 96-луночный
пластины и обработанные Твин-80 (контроль) или другими
концентрации (4, 8, 16, 32, 64 и 128 мкМ) DADS (Fluka
Co., Милуоки, Висконсин, США), и растворяется в Твин-80 при 8 г / л и
хранить при −20 ° C) 72 ч. Клетки HL-60 покрывали МТТ.
раствора (5 мкг / мл) при 37 ° C в течение 3 ч. Кристаллы формазана в форме
живыми клетками были растворены в абсолютном этиловом спирте и
сканированные на сканирующем многолуночном спектрофотометре (Spectra Max
190) на длине волны 570 нм. Согласно скорости ингибирования (IR) =
(Группа лечения 1-OD / контрольная группа OD) × 100%,
была рассчитана степень ингибирования.
Пятно Райта-Гимзы и уменьшение NBT проба
До индукции дифференцировки по DADS, HL-60 клетки поддерживали с логарифмической скоростью роста и высевали при плотность 1 × 104 клеток / лунка.После воздействия 8 мкМ DADS в течение 72 ч, клетки собирали по цитоспину. центрифугированием, окрашивали их красителем Райта-Гимзы и наблюдали их под микроскопом. Кроме того, обработанные клетки осаждали центрифугирование при 300 × g в течение 5 мин. Дифференциация клеток HL-60 оценивали добавлением 200 мкл клеточной суспензии в каждую лунку. к раствору, содержащему 2 мг / мл NBT (нитросинего тетразолия) и 0,24 мг / мл PMA в фосфатно-солевом буфере (PBS). В Процесс инкубации в течение 1 ч при 37 ° C останавливали добавлением 0.4 мл холодный 2 М HCl. Продукт формазана центрифугировали при 700 × g в течение 10 мин и растворяли в 200 мкл ДМСО. Поглощение раствор анализировали при 570 нм.
Иммунофлуоресценция CD11b
Иммунофлуоресценция была выполнена для подтверждения
субклеточная локализация общей миелоидной дифференцировки
маркер CD11b (ab24874).
После обработки DADS (8 мкМ) для
Через три дня клетки HL-60 собирали центрифугированием. Капли
клетки наносили на предметные стекла и инкубировали при комнатной температуре в течение
30 мин, фиксируется 4% полиоксиметиленом, затем пропитывается
0.5% Triton X-100 в PBS в течение 15 мин. После этого клетки были заблокированы
с козьей сывороткой в течение 30 минут, чтобы минимизировать неспецифическое связывание
первичное антитело. Применяли антитело CD11b (разведение 1: 100).
при 37 ° C в течение 1 часа с последующими 5-минутными промывками в PBS три раза. FITC
антикроличий IgG (ab6717) использовали для определения CD11b. Изображений
были получены с помощью флуоресцентного микроскопа Life AMAFD1000 и
измерено с помощью программного обеспечения Image EVOS (оба от Life Technologies
Corp., Ботелл, Вашингтон, США).
Ксенотрансплантат опухоли
Все процедуры на животных проводились в соответствии с
руководство Национального института здравоохранения по экспериментальным
использование животных.
Протокол утвержден Комитетом по
Этика экспериментов на животных Южно-Китайского университета.
Двухмесячных мышей вида Kunming были получены от
Центр лабораторных животных Южно-Китайского университета. Всего
5 × 106 клеток HL-60 вводили в левую почку.
оболочка капсулы мышей. DADS вводили через хвостовую вену
мышей в концентрации 21, 42 и 84 мг / кг массы тела
ежедневно в течение 5 дней. Контрольным мышам вводили такой же объем
транспортного средства (0.9% физиологический раствор). Размер опухоли измеряли от
6 день после инъекции. Объем опухоли рассчитывали по
по следующей формуле: Объем = Длина × Ширина3 × 0,5.
Уровень ингибирования = [(Объем контрольных опухолей — объем препарата
опухоли) / объем контрольных опухолей] × 100%. Опухолевые почки
фиксировали 70% этанолом в течение 24 ч, заливали парафином,
нарезали 5 мкМ и окрашивали H&E. потом
морфологические изменения клеток наблюдали с помощью оптического
микроскоп. Все операции проводились под пентобарбиталом натрия.
анестезия, и мы приложили все усилия, чтобы свести к минимуму страдания.
Анализ клеточного цикла методом проточной цитометрии обнаружение
Анализ клеточного цикла подтвержден проточной цитометрией. Вкратце, клетки HL-60 высевали в чашки диаметром 75 см. После лечения DADS (4, 8 и 16 мкМ) в течение 3 дней, клетки HL-60 были собирали, центрифугировали и промывали PBS. Затем 70% этанол был добавлен для фиксации клеток в течение ночи при 4 ° C. Затем после удаления этанолом и дважды промывали PBS, клетки расщепляли РНКазой А. в течение 1 ч при 37 ° C и окрашивали 800 мкл PI (50 мкг / мл) в темноте в течение 1 ч при 4 ° C.В конце концов, ДНК содержание клеточного цикла анализировали с помощью проточного цитометра. (Beckman Coulter EPICS-XL).
Трансуэлл миграция и вторжение анализы
Были определены анализы миграции и инвазии.
с использованием 24-луночных трансвеллентных камер (8 мкМ; Corning). Для
анализ миграции, клетки HL-60 ресуспендировали в бессывороточной
Среда RPMI-1640 и 100 мкл клеточной суспензии
(1 × 106 ячеек) засевали в верхние камеры.
RPMI-1640 (500 мкл), содержащий 10% FBS, добавляли к
нижние камеры.После инкубации в течение 24 ч мигрировавшие клетки на
нижнюю поверхность мембраны фиксировали 4% параформальдегидом для
30 мин и окрашивают 0,1% кристаллическим фиолетовым в течение 15 мин, и
рассчитывается под инвертным микроскопом. Протокол анализа инвазии
был таким же, как и в анализе миграции, за исключением того, что верхний
камеры сначала покрывали матригелем 1 мг / мл.
Белковый препарат
Общий белок из обеих необработанных клеток (контроль) и клетки, обработанные 8 мкМ DADS в течение 72 ч, были экстрагируют лизисным буфером (Amersham Biosciences), содержащим 8 М мочевина, 4% CHAPS, 40 мМ Трис, 1% DTT, 1 мМ PMSF, 0.5% буфер IPG.
2DE и морилка
Пробы белка (по 200 мкг) смешивали с
раствор гидратации (8 М мочевина, 2% CHAPS, 0,5% буфер IPG, 18 мМ DTT,
следы бромфенолового синего) и регидратировали с помощью полоски IPG 18 см (pH
4–7) в ячейке изоэлектрической фокусировки (ИЭФ) с последующим 1D ИЭФ в ячейке
максимальный ток 60 мкА / полоска IPG.
Полоски были
уравновешен в буфере A (8 М мочевина, 2% SDS, 50 мМ Трис-HCl, pH 6,8,
30% глицерина, 1% SDS и 0,2% DTT) в течение 15 мин и в буфере B (8 M
мочевина, 50 мМ Трис-HCl, pH 6.8, 30% глицерина, 1% SDS и 3%
йодацетамид) в течение 15 мин. 2D-электрофорез полосок был
выполнено на приготовленном 12% SDS-PAGE геле. Гели были закреплены в
фиксирующий раствор (40% метанол, 10% ледяная уксусная кислота) в помещении
температура в течение 30 мин, сенсибилизация в сенсибилизирующем растворе (30%
этанол, 0,2% тиосульфат натрия, 6,8% ацетат натрия), промывали
бидистиллированная вода, окрашенная серебром (0,25% серебра
нитрат), а затем проявился в проявляющем растворе (2,5% натрия
карбонат, 0.084 ‰ формальдегид) до появления белковой точки
полностью, после чего следует раствор с прекращенной активностью (1,5% ЭДТА)
немедленно.
Анализ изображений и статистика значение
гелей сканировали с помощью сканера Tsinghua Ziguang.
D2000 (Tsinghua Ziguang Co.) и анализировали с помощью анализа PDQuest 7.
1.
программное обеспечение (Bio-Rad), согласно заводской
инструкции. Количество каждого места было стандартизировано по общему количеству действительных
интенсивность пятна. Белковые пятна рассматривались как дифференциально
выражается только в том случае, если они выставлены как минимум на 2.0-кратная разница в
изобилие между контролем и лечением.
Расщепление белка на месте
Белковые точки вырезаны из гелей серебром пятно, обесцвеченное с помощью обесцвечивающего раствора [30 мМ K3Fe (CN) 6, 100 мМ Na2S2O3]. Далее образцы были восстановлен и алкилирован 100 мМ Nh5HCO3 (В нем 10 мМ ДТТ). После энзимолиза с использованием фермента TPCK-трипсин раствор (ТПКК-Трипсин 0,02 г / л, 20 мкМ HCl, 40 мМ Nh5HCO3, 10% акрилонитрил) в течение 16 ч, пробы экстрагировали экстракционным раствором (5% трифторуксусная кислота, 50% акрилонитрил) в течение 1 ч.
Анализ CapLC-ESI-Q-TOF-MS
Все данные взяты из Micromass Q-Tof micromass
спектрометр. Фрагменты пептида, элюированного CapLC, анализировали с помощью МС. и МС / МС после ввода масс-спектрометрического источника ионов: положительный ион
режим обнаружения, температура источника при 80 ° C, напряжение конусного отверстия
60 В, напряжение на сопле 3000 В, напряжение детектора 2700 В,
Диапазон сканирования приборного уровня (МС) составлял 200–1600.
Конверсия между первичным и вторичным рассеянным склерозом под контролем матери
ионная сила и электрический заряд, вторичный МС-анализ
анализировать первичный ион заданного порогового значения; каждый анализ
четырех материнских ионов с наибольшей интенсивностью, используя кусочки Glu-fib
тандемный калибровочный прибор.Программное обеспечение MassLynx выбрало каждую MS и
Данные МС / МС при элюировании концентрации соли преобразованы в
PKL-файл программы proteinLynx, содержащий размер первичного материнского иона.
(m / z), интенсивность и размер частиц вторичного иона,
который был введен в базу данных (NCBI), и поиск выполнялся с помощью
каскадная функция данных масс-спектра (поиск ионов МС / МС)
Программное обеспечение Mascot (Matrix Science, Ltd.
, Лондон, Великобритания). Поиск в базе данных
параметры: карбамидометил (C) — фиксированная модификация,
трипсин-лиаза, допускайте два максимально пропущенных расщепления,
пептиды Mw толерантность 1.2, толерантность Mw фрагментных ионов составляет 0,6, а
Показано 50 результатов. Мы подтвердили идентификацию белка на
основы идентификации пептидов до тех пор, пока пептидная оценка (Mowse
оценка) была выше порогового значения.
Анализ ОТ-ПЦР
Тотальную РНК экстрагировали из клеток с помощью TRIzol.
реагент (Invitrogen). Набор для ОТ-ПЦР (Thermo Fisher Scientific) был
используется для выполнения обратной транскрипции, и набор для ПЦР (Promega)
был применен для проведения ПЦР-анализа. Последовательности праймеров были такими
следующие: DJ-1, F, 5′-GTC AGC AGC TTC TAC CTG GAC-3 ′ и R, 5′-GTG
TTG TTC TGA GAG TGA AAG GCA CG-3 ‘; кофилин 1, F, 5’-CAA GAA GGC GGT
GCT CT-3 ‘и R, 5′-ACA AAG GTG GCG TAG GG-3′; β-актин, F, 5’-ACA
CTG TGC CCA TCT ACG AGG GG-3 ‘и R, 5′-ATG ATG GAG TTG AAG GTA GTT
TCG TGG AT-3 ′; RhoGDI2, F, 5’-GGG GCA TCA TCA AGA GCA-3 ‘и R,
5’-CCA GGC AGT TGT GGG AGT-3 ‘; β-актин, F, 5’-ACA CTG TGC CCA TCT
ACG AGG GG-3 ‘и R, 5′-ATG ATG GAG TTG AAG GTA GTT TCG TGG AT-3′;
кальретикулин (CTR), F, 5’-GGA AGA TGA GGA GGA AGA TGT C-3 ‘и R,
5’-CAG GAA GGA GAG CAG ATG AAA T-3 ‘; β-актин, F, 5’-GGA CCT GAC TGA
CTA CCT C-3 ‘и R, 5′-TAG TCG TTC GTC CTC ATA C-3′; PCNA, F,
5’-AGT CAG TCT TCA GGA TGT GCT-3 ‘и R, 5′-TGA CAT GGG ATG CTA GGC
ТТ-3 ′; β-актин, F, 5’-TGG CAT CCA CGA AAC TAC CT-3 ‘и R, 5’-TCA
CCT TCA CCG TTC CAG TT-3 ′.
Продукты ПЦР анализировали на 2%
агарозный гель, содержащий бромид этидия. Денситометрическое количественное определение
Продукты ПЦР идентифицировали с помощью программного обеспечения для анализа Labwork.
Отношение целевого гена к β-актину определяли количественно, чтобы получить
относительные кратные изменения экспрессии генов.
Вестерн-блоттинг
Пробы белка (по 3 мкг) были проанализированы
12% SDS-PAGE и переносили на мембраны из ПВДФ. Мембраны
блокировали на 2 ч при комнатной температуре в блокирующем буфере (3%
обезжиренное молоко / 0.1% Tween-20 / TBS), а затем инкубировали с первичным
антитела (антитело DJ-1 и β-актин; Santa Cruz Biotechnology,
Inc., Санта-Крус, Калифорния, США; кофилин 1, RhoGDI2, CTR и PCNA; Abcam)
при 4 ° C в течение ночи. После промывания 0,1% Tween-20 / TBS (TBST) для
10 мин, трижды, блоты покрывали конъюгированным с HRP
вторичные антитела (Abcam) в блокирующем буфере в течение 2 часов. В
мембраны промывали TBST, блот анализировали супер
сигнальная система обнаружения ECL.
Статистический анализ
Все эксперименты были повторены трижды, и данные показаны как среднее ± стандартная ошибка среднего.Программа SPSS 17.0 использовалась для выполнения Статистический анализ. Статистический анализ был оценен с использованием односторонний дисперсионный анализ. Статистически считалось значение P <0,05. существенный.
Результаты
Антипролиферативное средство и дифференцировка индукционное действие DADS на клетки HL-60
Активность пролиферации линии лейкозных клеток человека HL-60 был проанализирован с использованием анализа MTT и исключения красителя трипанового синего. тест-инкубирование с DADS в разных дозах. Дозозависимый цитотоксичность наблюдалась через 72 ч DADS-обработки при росте ИР 18, 30, 37, 48, 58 и 70% для 4, 8, 16, 32, 64 и 128 мкМ, соответственно по сравнению с необработанными клетками, как показано на рис.1А.
Рисунок 1 Антипролиферация и дифференциация
индукционные эффекты DADS на линии лейкозных клеток человека HL-60. |
(А)
Влияние DADS на жизнеспособность клеток линии HL-60. Клетки
(3 × 104) обрабатывали разной концентрацией
DADS (4, 8, 16, 32, 64 и 128 мкМ) и контроль (0,1%
Только Твин-80) в течение 72 часов, а жизнеспособные клетки анализировали с помощью МТТ.
проба. (B) Влияние DADS на уменьшение NBT в клетках HL-60. HL-60
клетки обрабатывали 4, 8, 16 и 32 мкМ DADS в течение 24, 48
и 72 ч.Контрольные клетки подвергались воздействию 0,1% твина-80.
Дифференцировку клеток HL-60 идентифицировали по снижению
Поглощение NBT при 570 нм. Значения представляют собой средние значения ± SEM трех
определения. * P <0,05 по сравнению с контролем. (С)
Роль 8 мкМ DADS в морфологическом изменении клетки HL-60
дифференциация. Клетки HL-60 обрабатывали DADS в течение 72 часов.
Контрольные клетки подвергали воздействию 0,1% твина-80. Мы собрали клетки
центрифугированием, окрашивали красителем Райта-Гимзы и наблюдали с использованием
световая микроскопия (× 400).(D) Влияние DADS на экспрессию клетки
маркер поверхностной дифференцировки CD11b.
Клетки HL-60 обрабатывали
DADS (8 мкМ) в течение 72 ч, а затем фиксировали в 4%
формальдегид / PBS и проницаемость 0,5% Triton X-100. CD11b
была показана иммунофлуоресценцией (красный цвет, левая панель). В
ДНК-интеркалирующий краситель DAPI использовался для распознавания ядер клеток (синий,
центральная панель). На правой панели отображается объединенное изображение для
выделить ядерный пул CD11b. Как показано на рис.
1C, необработанные клетки HL-60 показали типичные клетки миелоидного лейкоза.
морфология с большим продолговатым ядром, маленькой цитоплазмой и большой
соотношение ядра и цитоплазмы, в то время как 8 мкМ DADS индуцировал
гранулоцитарная линия дифференцировки (стрелка).Более того, чтобы
чтобы выяснить роль DADS в дифференциации, мы исследовали
Анализ восстановления NBT и экспрессии CD11b в клетках HL-60. В качестве
показано на фиг. 1B и в таблице I, по сравнению с необработанным контролем 8
мкМ DADS может заметно индуцировать дифференцировку.
В
Рис. 1D, выражение
CD11b увеличился после лечения 8 мкМ DADS в течение 3 дней, поскольку
по сравнению с контролем.
Таблица IЭффект дифференциации, индуцированный DADS в ячейках HL-60. |
Таблица I
Эффект дифференциации, индуцированный DADS в ячейках HL-60.
| Группа | Классификация
клетки | Индукция степень дифференцировки (%) | |||
|---|---|---|---|---|---|
| Промелоцит | Миелоцит | Метамелоцит | Полосчатая клетка и PMN | ||
| Ячейки HL-60 | 0,85 ± 0,006 | 0,145 ± 0,008 | 0 | 0 | 0 |
| 8 μ M ПАПА | 0. 063 ± 0,150 | 0,150 ± 0,021 | 0,113 ± 0,036 | 0,673 ± 0,025a | 91,3 ± 2,1a |
DADS вызывает подавление роста и эффект дифференцировки на клетки HL-60 in vivo
Для определения роли DADS в лейкемии у vivo клетки HL-60 вводили мышам, и рост опухоли ксенотрансплантата измеряли после инъекции DADS в течение пяти дней. Опухоли DADS росли намного медленнее, чем контрольные опухоли (рис. 2А). Скорость ингибирования опухоли увеличилась с 49.5, от 56,9 до 65,9% по DADS от 21, 42 до 84 мг / кг массы тела каждый день в течение 5 дней по сравнению с контрольными опухолями (рис. 2B), что позволяет предположить, что DADS контролировал прогрессирование опухоли ксенотрансплантата.
Результаты окрашивания H&E показали, что
эффект дифференцировки был вызван 21 мг / кг, ~ 42 мг / кг DADS в
клетки HL-60 под мембраной почечной капсулы.
Оптический
микроскопия (× 40) показала, что объем клеток уменьшился, краситель
ядер был явно более светлым, с почечными или дольчатыми
ядра, и нуклео-цитоплазматическое соотношение клеток HL-60 было достаточно
small, представляющий типичную миелобластную морфологию, с
дифференцировка гранулоцитарной линии.Принимая во внимание, что 84 мг / кг DADS
индуцированный некроз в клетках HL-60 явно под почечной капсулой
мембрана (рис. 2С).
Влияние DADS на клеточный цикл HL-60 ячейки
Как показано на рис. 3,
Анализ содержания ДНК в проточной цитометрии показал, что среди
необработанные клетки HL-60, 66% были распределены в S-фазе, 23% были
накопилось в фазе G0 / G1, и только 11% были
в фазе G2 / M. Увеличение клеток G0 / G1 и
соответствующее уменьшение S-клеток было дозозависимым, когда HL-60
клетки обрабатывали 4, 8, 16 и 32 мкМ DADS.Это было
обнаружил, что клетки G0 / G1 были повышены до
пик (44,6%, P <0,05), хотя клетки S-фазы снизились до
минимум (48,5%, P <0,05) соответственно при концентрации 8
мкМ, аналогично эффектам, вызванным ATRA.
DADS подавляет миграцию клеток HL-60 и вторжение
Мы обработали клетки 8 мкМ DADS для 12 и 24 h, и наблюдали влияние DADS на миграцию и вторжение линия клеток лейкемии HL-60. Как показано на фиг. 4A, относительно контрольных клеток HL-60, произошло заметное снижение миграционной способности HL-60 клетки в 8 мкМ DADS в течение 12 и 48 часов.Как показано в Рис. 4B, количество ячеек, которые пересекали мембрану в группе лечения DADS были заметно ниже, чем в контрольной группе. Эти данные позволяют предположить, что DADS значительно подавил миграцию и инвазию HL-60 клетки.
Идентификация дифференциального выражения белки по 2-DE и MS
Для обнаружения белков дифференциальной экспрессии, индуцированных
с помощью DADS клетки HL-60 подвергали воздействию 8 мкМ DADS в течение 72 часов.
Белки из DADS-обработанных и необработанных клеток были разделены
2-DE соответственно, и гели окрашивали серебром для получения
видны белковые пятна в гелях 2-DE.Две типичные карты 2-DE
из DADS-обработанных и необработанных групп представлены на фиг.
5A и B, соответственно. Сравнивая
соотношение каждого пятна в гелях было идентифицировано как
отчетливо выражено, что белковые пятна имеют постоянный
различия (≥2-кратные) между группой, получавшей DADS, и группой, не получавшей лечения
группа в трех экспериментах. Все дифференциальные белковые пятна
были резецированы из окрашенных гелей и расщеплены трипсином. 18
по-разному экспрессируемые белки были идентифицированы на основе
CapLC-ESI-Q-TOF-MS и запрос базы данных с NCBI (таблица II).Эти белковые пятна были
отмечены стрелками на фиг. 5A и
B. По сравнению с необработанной группой уровни экспрессии
четыре белка были активированы, в то время как уровни экспрессии
другие 14 белков были подавлены в группе, получавшей DADS.
Таблица IIБелки дифференциальной экспрессии индуцируется DADS в клетках HL-60. |
Таблица II
Белки дифференциальной экспрессии
индуцируется DADS в клетках HL-60.
| SPOT No. | Регистрационный номер | Название белка | Теоретический Mr (кДа) / pI | Экспрессия переделка |
|---|---|---|---|---|
| 1 | P27797 | Кальретикулин (предшественник) | 48,1 / 4,29 | С пониженной регуляцией |
| 2 | P28066 | Субъединица протеасомы α тип 5, мультикаталитическая эндопептидаза с дзета-цепью протеасомы сложная цепочка дзета | 26. 4 / 4,74 | С пониженной регуляцией |
| 3 | P12004 | Пролиферирующая клетка ядерный антиген, PCNA, циклин | 28,8 / 4,57 | С пониженной регуляцией |
| 4 | O14805 | РНК-связывающий белок регуляторная субъединица, белок DJ-1 | 19,8 / 6,33 | С пониженной регуляцией |
| 5 | P52566 | Rho Ингибитор диссоциации GDP 2, Ly-GDI | 22,99 / 5,10 | С пониженной регуляцией |
| 6 | P10668 | Кофилин, немышечный изоформа, CFL1 | 18. 5 / 8,16 | С пониженной регуляцией |
| 7 | P00918 | Карбоангидраза II | 29,1 / 6,86 | С пониженной регуляцией |
| 8 | P04075 | Альдолаза A, альдолаза мышечного типа, фруктозо-бисфосфатальдолаза A | 39,3 / 8,39 | С пониженной регуляцией |
| 9 | P60174 | Триозофосфат изомераза | 26,5 / 6,51 | с пониженной регуляцией |
| 10 | Q06830 | Пероксиредоксин 1, Тиоредоксинпероксидаза 2 | 22. 1 / 8,27 | С пониженной регулировкой |
| 11 | P30048 | Тиоредоксин-зависимая пероксидредуктаза, митохондриальный (предшественник), пероксиредоксин 3 | 27,7 / 7,68 | С пониженной регуляцией |
| 12 | P54819 | Аденилаткиназа изофермент 2, трансфосфорилаза АТФ-АМФ | 26,3 / 7,85 | С пониженной регуляцией |
| 13 | Q14590 | Белок цинкового пальца 93 | 1. 63e + 003 | С пониженной регулировкой |
| 14 | P04406 | Глицеральдегид-3-фосфат эгидрогеназа | 4.77e + 004 | С пониженной регуляцией |
| 15 | Q05315 | Эозинофил лизофосфолипаза, кристаллический белок Шарко-Лейдена, Галактин-10 | 16,3 / 6,80 | с повышенной регуляцией |
| 16 | Q14103 | Гетерогенный ядерный рибонуклеопротеин D0, hnRNP D0, AUF1 | 38. 4 / 7,61 | с повышенной регуляцией |
| 17 | Q15149 | плектин 1, Гемидесмосомный белок 1 | 531,7 / 5,73 | с повышенной регуляцией |
| 18 | P13804 | Электронный перенос α-субъединица флавопротеина | 35,1 / 8,62 | с повышенной регуляцией |
Проверка дифференциала, вызванного DADS гены экспрессии в клетках HL-60
Среди идентифицированных белков DJ-1, кофилин 1,
RhoGDI2, CTR и PCNA показали значительную разницу
экспрессия в DADS-обработанных клетках в отличие от необработанных клеток.
На рис. 5C показан типичный
сравнение пяти белков. Эти пять белков были
проверено. ОТ-ПЦР и вестерн-блоттинг применяли для обнаружения
паттерн экспрессии этих пяти генов после того, как клетки HL-60 были
обрабатывали 8 мкМ DADS в течение разных периодов времени. Как показано
на фиг. 6А уровни мРНК
DJ-1, кофилин 1, RhoGDI2, CTR и PCNA снизились в
зависящий от времени способ. Соответственно, аналогичные изменения в белке
уровни также были обнаружены в клетках HL-60 после обработки DADS
(Рис.6Б). Как следствие,
Изменения экспрессии генов, вызванные DADS, были выявлены в
транскрипционный и трансляционный уровни, согласованные с
результаты сравнительных протеомических исследований.
Обсуждение
DADS — основной активный компонент противоопухолевого препарата.
аллилсульфиды в чесноке, которые, как сообщалось, вызывают
подавление пролиферации во многих типах опухолевых клеток (8). Наши результаты показали, что DADS
ингибировал пролиферацию в клеточной линии лейкемии HL-60 и задерживал
ячейки в фазе G0 / G1.
Ранее мы подтвердили
что DADS индуцировал дифференцировку в клеточной линии рака желудка человека
MGC803 путем подавления активации передачи сигналов киназы ERK1 / 2 MAP
путь (13). В настоящее время
мы исследовали роль DADS в дифференциации
клетки лейкемии человека HL-60 in vitro и in vivo. В
клетки исследовали окрашиванием по Райту-Гимзе, уменьшением NBT,
экспрессия маркера мембранной дифференцировки CD11b, а также
распределение фазы клеточного цикла. Наши результаты показывают, что 8 мкМ
DADS приводит к большему снижению NBT и экспрессии
гранулоцитарный маркер CD11b и индуцирует гранулоцитарный рост клеток HL-60.
происхождение дифференциации.Кроме того, DADS индуцировал
G0 / G1 остановка, а также ингибирование роста и
эффект дифференцировки на ксенотрансплантаты клеток HL-60 под почечной капсулой
мембрана у мышей. Мы сравнили деление клеточного цикла в 8
мкМ клеток, обработанных DADS, с клетками в 1 мкМ, обработанных ATRA
клеток, было показано, что DADS может вызывать увеличение
G0 / G1 и соответствующее уменьшение S
клетки аналогичны эффектам, индуцированным ATRA.
Кроме того, у нас также есть
обнаружили, что коэффициенты ингибирования пролиферации не имеют значительных
разница клеток HL-60 в группе, обработанной 8 мкМ DADS
и группа, обработанная 1 мкМ ATRA, через 3 дня (Таблица III).Кроме того, снижение НБТ
количество клеток HL-60 не имело значительной разницы в DADS-обработанных
в группе по сравнению с группой, получавшей 1 мкМ ATRA
на 24, 48, 72 и 96 ч (Таблица
IV). То есть, 8 мкМ DADS обладают антипролиферативным действием.
и эффект индукции дифференцировки в клетках HL-60, аналогичный
эффекты, индуцированные 1 мкМ ATRA. Эти результаты показывают, что
DADS может быть многообещающим противолейкозным соединением для индукции, аналогичным
в ATRA. Механизмы индукции дифференцировки
от DADS до конца не выяснены.
Таблица IIIЗначения OD570 и коэффициенты ингибирования пролиферации клеток HL-60, обработанных DADS или ATRA через 3 дня. |
Таблица III
Значения OD570 и
коэффициенты ингибирования пролиферации клеток HL-60, обработанных DADS или
ATRA через 3 дня.
| Внешний диаметр 570 значение | Распространение коэффициент ингибирования (%) | |
|---|---|---|
| Контроль | 0.51 ± 0,037 | |
| 8 мкм M DADS | 0,34 ± 0,061 | 30 |
| 1 мкм M ATRA | 0,32 ± 0,027 | 34 |
Таблица IV Влияние способности восстановления NBT
клеток HL-60, обработанных DADS или ATRA. |
Таблица IV
Влияние способности к восстановлению NBT клеток HL-60, обработанных DADS или ATRA.
| Контроль | 1 μ M ATRA | 8 мкм M DADS | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 24 часа | 0,13 ± 0,03 | 0,16 ± 0,02 | 0,15 ± 0,02a | ||||
| 48 часов | 0,18 ± 0,03 | 0,28 ± 0,04 | 0,29 ± 0,0380 | 72 ч | 0,27 ± 0,002 | 0,32 ± 0,03 | 0,32 ± 0,03a |
| 96 ч | 1. 01 ± 0,23 | 1,41 ± 0,19 | 1,47 ± 0,23a |
Редко сообщается, что DADS подавляет миграции и инвазии раковых клеток, а также молекулярных механизмы DADS до конца не освещены. Лай и др. al сообщил, что DADS может контролировать миграцию и вторжение в клетки рака толстой кишки человека Colo 205 (14). Это исследование показало, что DADS ингибирует миграцию и инвазию клеток HL-60. Тем не менее точные молекулярные механизмы, лежащие в основе этих антиметастатических эффекты DADS полностью не выяснены.
В настоящем исследовании мы осознали потенциал
мишени, контролируемые DADS в клетках HL-60 с использованием сравнительного
метод протеомики. Среди дифференциально экспрессируемых белков
регулируется DADS, DJ-1, кофилином 1, RhoGDI2, кальретикулином и PCNA
привлекли наше внимание как нарушение регуляции их выражения и
функции были тесно связаны с онкогенезом и
прогрессия.
DJ-1 выделено при досмотре на c-Myc-связывающие белки в 1997 г. (15). Повышение экспрессии DJ-1 имеет были показаны при различных формах рака, включая лейкоз (16,17).Повышенные уровни экспрессии DJ-1 в раковых клетках положительно связаны с тяжестью рака с плохим прогнозом, включая инвазию и метастазирование (18,19). Окислительный статус DJ-1 вызывает пролиферацию клеток и трансформация путем регуляции активности PTEN (20). Сверхэкспрессия DJ-1 и HSP90α и потеря PTEN связаны с инвазией в уротелиальный карцинома, Ли и др. (19). DJ-1 индуцирует EMT, ингибируя экспрессию PTEN и активацию Akt. В качестве мишени для p53 во время трансформации DJ-1 играет ключевую роль в p53-опосредованный путь AKT и p53-управляемый окислительный стресс ответ (21).В этом исследовании это указали, что снижение уровня DJ-1 DADS может привести к дифференциация и подавление роста и инвазии в HL-60 клетки.
Показано, что повышенный уровень кофилина 1
выражение определенно связано с прогрессированием яичников человека
дифференцировка рака, которая демонстрирует, что активация
кофилин 1 может ускорить распространение и инвазию рака
клетки, что приводит к развитию рака яичников (22).
Повышение уровня экспрессии кофилина
индуцированная диазиноном усиливает деполимеризацию актиновых филаментов,
а затем способствовал дифференцировке в клеточной линии нейробластомы N2a
(23).Наши данные показали, что DADS
может снизить экспрессию кофилина 1 в лейкозных клетках и
продемонстрировали, что ингибирование активации кофилина 1 может быть
коррелирует с ролью DADS в борьбе с инвазией в лейкозных клетках.
RhoGDI2 рассматривается как семейство Rho GTPase
ингибиторы диссоциации (GDI). GDI являются жизненно важными регуляторами Rho
Функция GTPase, представленная в виде комплекса с Rho GTPase,
регулируя их обмен нуклеотидов и мембранную ассоциацию.
Соответственно, они оказывают решающее влияние на опосредование актина.
цитоскелет, полярность клеток, динамика микротрубочек, мембрана
транспортные пути и активность факторов транскрипции (24).RhoGDI2 был подтвержден как
регулятор метастазирования опухоли, но его функция при раке все еще
спорный. RhoGDI2 может способствовать инвазии опухоли, регулируемой HGF
и метастазы, которые могут быть использованы в качестве надежной мишени для желудочного
противораковая терапия (25).
В
гепатоцеллюлярная карцинома, RhoGDI2 имеет повышенную регуляцию и был
идентифицирован как протоонкоген и играет жизненно важную роль в опухоли
рост и вторжение (26). RhoGDI2
как сообщается, оказывает значительное влияние на апоптоз клеток и
метастазы, и они могут привести к неблагоприятному развитию ОМЛ
(27).Rac1 был признан
жизненно важный кооператор и посредник RhoGDI2 (28). RhoGDI2 предпочтительно связывается с Rac1
и влияет на его активность, в отличие от других членов Rho GTPase
(28). Другое исследование показало, что RhoC
также регулируется RhoGDI2 (29). Следовательно, RhoGDI2 может быть
кандидат-мишень для DADS против инвазии лейкозных клеток.
CRT, многофункциональный белок, в основном расположен в
эндоплазматический ретикулум и чрезвычайно консервативен в различных
разновидность. Взаимосвязь между уровнями экспрессии CRT и
туморогенез широко анализировался при различных формах рака, и
большинство исследований показали, что опухолевые ткани заметно экспрессируют
более высокие уровни CRT по сравнению с нормальными тканями (30).
Это также демонстрирует, что CRT играет
решающую роль в развитии различных видов рака и
влияние CRT на образование и прогрессирование опухоли зависит от клетки
виды и клинические стадии. Повышенная экспрессия CRT может иметь
значительное влияние на прогрессирование рака. Регулирование уровней CRT
оказывает глубокое влияние на пролиферацию раковых клеток и ангиогенез, поскольку
а также дифференцировка клеток нейробластомы; механизм, который
CRT подавляет пролиферацию клеток и усиливает клеточную
дифференцировка связана с повышающей регуляцией экспрессии VEGF
(31).Лу и др. Подтвердили
что CRT играет решающую роль в контроле клеточной адгезии и
миграция с помощью различных механизмов (32). В этом исследовании мы обнаружили, что DADS
снижение экспрессии CRT в лейкозных клетках HL-60. Мы считаем, что
ингибирующее влияние на экспрессию CRT, индуцированного DADS, может
вносят свой вклад в его противоопухолевую роль в лейкозных клетках HL-60.
Сообщается, что разные белковые профили были
обнаружен между линией клеток меланомы и меланоцитами; то
основная форма белка DJ-1, кофилин 1 и кальретикулин были более
значительно экспрессируется в клетках меланомы А375, чем в меланоцитах
(33).
Когда Цинь и др.
сравнили профили экспрессии дифференциальных белков
группа резистентных к ретиноевой кислоте (РА) и чувствительных клеток, они
провели скрининг белков, связанных с устойчивостью к RA, протеомными
анализа, результаты показали, что DJ-1 и кальретикулин являются
участвуют в белках, связанных с устойчивостью к ATRA (34).
PCNA считается молекулярным маркером для
пролиферация, которая основана на его функции при репликации. Над
в последние десятилетия дальнейшие исследования дали более глубокое понимание
PCNA как координатор фундаментальной клеточной роли в клетке
рост, смерть и поддержание.Прогресс исследований в выявлении
потенциал нацеливания на PCNA для лечения рака не был
всесторонне выяснены, хотя биология PCNA в
распространение было тщательно изучено (35). Было показано, что
посттрансляционные модификации PCNA могут принимать важное участие в
влияя на клеточный выбор между различными путями, в том числе
апоптоз, репарация ДНК или пути контрольных точек клеточного цикла, для
цель поддержания стабильности генома (36).
Куркумин снижает PCNA и Rho-A
экспрессия белка и ингибирует независимый от якорения рост
клеточные линии рака молочной железы (37).Точно так же наши исследования показывают, что DADS может ингибировать как PCNA, так и
Экспрессия RhoGDI2, предполагая, что снижение PCNA и RhoGDI2
белок может привести к подавлению роста клеток.
В заключение, противоопухолевые эффекты DADS могут быть обусловлены к инактивации онкогенов и активации опухолевых супрессоров. Однако потенциальные молекулярные механизмы, контролируемые DADS в лейкоз в основном неизвестен. Соответственно, мы определили DADS-индуцированные белки дифференциальной экспрессии в лейкозных клетках используя подход сравнительной протеомики в этом исследовании.Эти результаты достойны не только раскрытия потенциальных целей для DADS, но и дальнейшее доказательство его противоопухолевых механизмов в будущем исследования, проводящие клиническое лечение лейкемии.
Сокращения:
ПАПА | диаллил дисульфид |
RhoGDI2 | Ингибитор диссоциации RhoGDP 2 |
CTR | кальретикулин |
AML | острый миелоидный лейкоз |
ПТРК | все- транс ретиноевой кислоты |
ATO | триоксид мышьяка |
NBT | нитросиний тетразолий |
PMN | полиморфно-ядерный |
H&E | гематоксилин и эозин |
CapLC-ESI-Q-TOF-MS | капиллярная жидкость хроматография, электрораспылительная ионизация, квадрупольное время пролетно-масс-спектрометрия |
ТБС | Солевой раствор с трис-буфером |
TBST | Трис-буферный физиологический раствор / Твин-20 |
PCNA | ядерный антиген пролиферирующих клеток |
Благодарности
Это исследование было поддержано Национальным природным
Научный фонд Китая (гранты №81100375, 31201027 и
81400117), Китайский фонд естественных наук провинции Хунань
(грант № 2015JJ4042), Patency Foundation of Innovation
Платформа Хунаньского провинциального университета Китая (грант №
11К057).
Исследование проводилось с использованием оборудования, приобретенного на
финансирование из программы строительства ключевой дисциплины в
Провинция Хунань, Китай (фундаментальные медицинские науки в Университете
Южный Китай).
Список литературы
1 | Шленк РФ: Постремиссионная терапия острый миелоидный лейкоз.Haematologica. 99: 1663–1670. 2014 г. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI |
2 | Mrózek K, Marcucci G, Nicolet D, Maharry К.С., Беккер Х., Уитман С.П., Метцелер К.Х., Швинд С., Ву Ю.З., Kohlschmidt J, et al: Прогностическое значение европейского Стандартизированная система LeukemiaNet для отчетности цитогенетических и молекулярные изменения у взрослых с острым миелоидным лейкозом. J Clin Онкол. 30: 4515–4523. 2012. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI |
3 | Морсо Ф, Шато С, Орсини М,
Trécul A, Dicato M и Diederich M: природные соединения и
фармацевтические препараты перепрограммируют пути дифференцировки лейкозных клеток. |
4 | Суй М., Чжан З. и Чжоу Дж .: Торможение факторы терапевтического действия триоксида мышьяка у пациентов с острый промиелоцитарный лейкоз. Чин Мед Дж (англ.). 127: 3503–3506. 2014. |
5 | Gallagher RE: Устойчивость к ретиноевой кислоте в острый промиелоцитарный лейкоз. Лейкемия. 16: 1940–1958.2002 г. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI |
6 | Санс М.А. и Монтесинос П. Как мы предотвращаем и лечить синдром дифференцировки у пациентов с острым промиелоцитарный лейкоз. Кровь. 123: 2777–2782. 2014. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI |
7 | Kweon SH, Song JH, Ким HJ, Ким TS и Чой
BG: индукция дифференцировки лейкозных клеток человека с помощью PKC / MAPK
пути арсантина, сесквитерпенового лактона из Artemisia
сантолина. |
8 | Йи Л и Су Q: Молекулярные механизмы противораковые эффекты диаллилдисульфида. Food Chem Toxicol. 57: 362–370. 2013. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI |
9 | Сундарам С.Г. и Милнер Дж.А.: Диаллил дисульфид подавляет рост опухолевых клеток толстой кишки человека ксенотрансплантаты у бестимусных голых мышей.J Nutr. 126: 1355–1361. 1996. PubMed / NCBI |
10 | Йи Л, Джи ХХ, Линь М, Тан Х, Тан Й, Вэнь Л, Ma YH и Su Q: диаллилдисульфид вызывает апоптоз у человека. лейкозные клетки HL-60 через активацию JNK, опосредованную реактивными кислород. Pharmazie. 65: 693–698. 2010.PubMed / NCBI |
11 | Йи Л, Цзи ХХ, Тан Х, Фэн МЫ, Тан И, Вэнь Л
и Su Q: участие Mcl1 в индуцированном диаллилдисульфидом G2 / M
остановка клеточного цикла в клетках HL-60. |
12 | Гарадаги Ф., Вайнберг ЧР, Мигер Д.А., Имаи Б.С. и Мише С.М.: Масс-спектрометрическая идентификация белки из окрашенного серебром полиакриламидного геля: метод удаление ионов серебра для повышения чувствительности. Электрофорез. 20: 601–605. 1999. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI |
13 | Лин Х, Чжан ЛИ, Су Цюй, Сон Й, Ло Цзы, Zhou XT, Zeng X, He J, Tan H и Yuan JP: Эрк участвует в дифференцировка, вызванная диаллилдисульфидом в желудке человека линия раковых клеток MGC803.Cell Mol Biol Lett. 11: 408–423. 2006 г. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI |
14 | Лай К.К., Сюй СК, Го К.Л., Ян Дж.С., Ма ЦЙ, Лу
HF, Tang NY, Hsia TC, Ho HC и Chung JG: диаллилсульфид, диаллил
дисульфид и диаллилтрисульфид ингибируют миграцию и инвазию в
клетки рака толстой кишки человека colo 205 за счет ингибирования матрикса
выражения металлопротеиназы-2, -7 и -9. |
15 | Нагакубо Д., Тайра Т., Китаура Х., Икеда М., Tamai K, Iguchi-Ariga SM и Ariga H: DJ-1, новый онкоген, который трансформирует мышиные клетки NIh4T3 в сотрудничестве с ras.Биохим Biophys Res Commun. 231: 509–513. 1997. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI |
16 | Чжоу X, Сюй Н, Ли Р, Сяо И, Гао Г, Лю Цюй, Ding L, Li L, Li Y, Du Q и др.: Сравнительное протеомное исследование Апоптоз, индуцированный гомохаррингтонином в клетках лейкемии K562. Leuk Лимфома. 56: 2162–2169. 2015. Просмотр статьи: Google Scholar |
17 | Лю Х, Ван М., Ли М, Ван Д., Рао Ц., Ван
Y, Xu Z и Wang J: Экспрессия и роль DJ-1 при лейкемии.Biochem Biophys Res Commun. |
18 | Бай Дж, Го Ц, Сунь В, Ли М, Мэн Х, Юй, Jin Y, Tong D, Geng J, Huang Q и др.: DJ-1 может способствовать метастаз немелкоклеточного рака легкого. Mol Biol Rep. 39: 2697–2703. 2012. Просмотр статьи: Google Scholar |
19 | Lee H, Choi SK и Ro JY: чрезмерное выражение DJ-1 и HSP90α, и потеря PTEN, связанная с инвазивным уротелиальный рак мочевого пузыря: возможный прогноз маркеры.Oncol Lett. 3: 507–512. 2012.PubMed / NCBI |
20 | Ким YC, Китаура Х, Тайра Т, Игучи-Арига SM и Ariga H: окисление DJ-1-зависимой трансформации клеток через прямую привязку DJ-1 к PTEN. Int J Oncol. 35: 1331–1341. 2009 г., PubMed / NCBI |
21 | Vasseur S, Afzal S, Tomasini R,
Гийомон Ф. |
22 | Чжоу Дж, Ван И, Фэй Дж и Чжан В: экспрессия кофилина 1 положительно коррелирует с дифференциация эпителиального рака яичников человека. Oncol Lett. 4: 1187–1190. 2012.PubMed / NCBI |
23 | Харрис В., Сачана М., Фласкос Дж. И Харгривз AJ: Протеомный анализ дифференцирующейся нейробластомы клетки, обработанные сублетальным нейритом ингибирующими концентрациями диазинон: идентификация новых биомаркеров эффекта.Токсикол Appl Pharmacol. 240: 159–165. 2009. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI |
24 | Хисман SJ и Ридли AJ: Млекопитающее Ро
GTPases: новые сведения об их функциях из исследований in vivo. |
25 | Ко С.А., Ким М.К., Ли К.Х., Ким С.В. и Ким-младший: RhoGDI2 связан с HGF-опосредованной инвазией опухоли через VEGF при раке желудка.Clin exp Метастаз. 31: 805–815. 2014 г. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI |
26 | Фанг И, Йи Дж, Личжи Л. и Цючэн Ц .: Ро Ингибитор диссоциации GDP бета способствует пролиферации клеток и инвазия путем модуляции пути AKT в гепатоцеллюлярной карциноме. ДНК Cell Biol. 33: 781–786. 2014. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI |
27 | Лопес-Педрера C, Вильяльба JM, Сендонес E,
Barbarroja N, Gómez-Díaz C, Rodríguez-Ariza A, Buendía P, Torres A
и Velasco F: Протеомный анализ острого миелоидного лейкоза:
Выявление потенциальных ранних биомаркеров и терапевтических
цели. |
28 | Гринер Е.М. и Теодореску Д.: Лица и друзья RhoGDI2. Метастазы рака Rev. 31: 519–528. 2012 г. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI |
29 | Гринер Э.М., Данчик ГМ, Костелло Дж. К., Оуэнс C, Гуин С., Эдвардс М.Г., Браутиган Д.Л., Теодореску Д. и Ро К.: RhoC является неожиданной мишенью RhoGDI2 для предотвращения легочного колонизация раком мочевого пузыря.Mol Cancer Res. 13: 483–492. 2015 г. Просмотр статьи: Google Scholar: |
30 | Заманян М., Виракумарасивам А., Абдулла С. и Росли Р.: Кальретикулин и рак. Pathol Oncol Res. 19: 149–154. 2013. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI |
31 | Вен У. |
32 | Лу Ю.К., Вен В.К. и Ли Х. Функциональные роли кальретикулина в биологии рака. Biomed Res Int. 2015: 5265242015. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI |
33 | Капуто Е., Майорана Л., Васта В., Пеццино FM, Sunkara S, Wynne K, Elia G, Marincola FM, McCubrey JA, Libra M и др. al: Характеристика клеточных линий меланомы человека и меланоцитов. протеомным анализом.Клеточный цикл. 10: 2924–2936. 2011. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI |
34 | Цинь Х, Лю Т., Ян Дж.Л., Хуан Х, Лю Б. |
35 | Ван SC: PCNA: Тихая домработница или потенциальная терапевтическая цель? Trends Pharmacol Sci.35: 178–186. 2014. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI |
36 | Чжу Кью, Чанг И, Ян Дж и Вэй Кью: Посттрансляционные модификации ядер пролиферирующих клеток антиген: ключевой интегратор сигналов для ответа на повреждение ДНК (обзор). Oncol Lett. 7: 1363–1369. 2014.PubMed / NCBI |
37 | Калаф GM, Эчибуру-Чау C, Вен Джи, Баладжи
AS и Рой D: Влияние куркумина на облученные и
трансформированные эстрогеном линии клеток груди человека. |
Biotechnol Adv. 33: 785–797. 2015. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI
Arch Pharm Res. 38: 2020–2028. 2015. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI
Oncol Rep. 27: 1911–1917.
2012.PubMed / NCBI
Environ Toxicol.
28: 479–488. 2013. Просмотр статьи: Google Scholar
, Тардивель-Лакомб Дж., Мак Т.В. и Иованна Дж. Л.:
Последствия активации DJ-1 после потери p53 и клеток
трансформация.Онкоген. 31: 664–670. 2012.
Nat Rev Mol Cell Biol. 9: 690–701. 2008. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI
Протеомика. 6 (Дополнение 1): S293 – S299. 2006. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI
С., Линь К.Х., Ву ПЙ, Лу Ю.К., Вэн Ю.К.,
Wang BJ, Liao YF, Hsu WM, Lee WT и Lee H: кальретикулин регулирует
VEGF-A в клетках нейробластомы.Mol Neurobiol. 52: 758–770. 2015 г.
Просмотр статьи: Google Scholar
,
Song X, Zhao X и Wei YQ: скрининг белков, связанных с ретиноевой
кислотостойкость по протеомному анализу. Чжунхуа И Сюэ За Чжи.
87: 520–525. 2007. На китайском языке. PubMed / NCBI
Int J Oncol.
40: 436–442. 2012.Трансфекция плазмидной ДНК в клетки HL-60 с использованием реагента липофектамина LTX | Thermo Fisher Scientific
РеагентLipofectamine® LTX — это запатентованный препарат не животного происхождения для трансфекции ДНК в эукариотические клетки с низкой цитотоксичностью . В этой ссылке представлена рекомендуемая процедура трансфекции плазмидной ДНК в лимфобласты человека HL-60 (ATCC Cat. No.CCL-240) с использованием реагента Lipofectamine® LTX (Кат. № 15338-100).
Важные рекомендации по трансфекции
Следуйте этим важным рекомендациям при трансфекции ДНК в клетки HL-60 с использованием реагента Lipofectamine® LTX:
- Добавление антибиотиков в среду во время трансфекции может привести к гибели клеток, и не было протестировано для клеток HL-60. Если вы хотите использовать антибиотики во время трансфекции, тщательно проверьте свои условия.
- Поддерживайте одинаковые условия посева между экспериментами.Используйте клетки с низким проходом; перед трансфекцией убедитесь, что клетки здоровы и жизнеспособны более чем на 90%.
- Трансфекцию можно проводить как в присутствии, так и в отсутствие сыворотки. Проверьте бессывороточную среду на совместимость с реагентом Lipofectamine® LTX.
- Использование реагента PLUS ™ (каталожный № 11514-015) повышает эффективность трансфекции в клетках HL-60.
- Мы рекомендуем Opti-MEM® I Reduced Serum Medium (Cat. No. 31985-062) для разбавления ДНК и реагента Lipofectamine® LTX перед образованием комплекса.
- Посетите сайт www.lifetechnologies.com/transfection или обратитесь в службу технической поддержки, чтобы узнать о других специализированных протоколах трансфекции (включая рекомендации по использованию реагента PLUS ™ и антибиотиков для конкретных типов клеток, а также протокол для векторных РНКи). Реагент
- Lipofectamine® LTX хорошо подходит для экспериментов с векторной РНКи. Для трансфекций siRNA и Stealth ™ RNAi мы рекомендуем Lipofectamine® RNAiMAX (№ по каталогу 13778-075). Посетите www.lifetechnologies.com/RNAi или обратитесь в службу технической поддержки для получения дополнительной информации.
Для трансфекций siRNA и Stealth ™ RNAi мы рекомендуем Lipofectamine® RNAiMAX (№ по каталогу 13778-075). Посетите www.lifetechnologies.com/RNAi или обратитесь в службу технической поддержки для получения дополнительной информации.
Необходимые материалы
Перед началом работы имейте под рукой следующие реагенты:
- Клетки HL-60, поддерживаемые в среде DMEM с добавлением L-глутамина (кат. № 11965-084), 0,1 мМ раствора незаменимых аминокислот MEM (кат. № 11140-050) и 10% фетальной бычьей сыворотки ( Кат. № 26140-079). Выращивайте клетки при 37 ° C с 5% CO 2 .
- Представляющая интерес плазмидная ДНК (100 нг / мкл или выше)
- Lipofectamine® LTX Reagent (хранить при + 4 ° C до использования) и PLUS ™ Reagent (при желании; хранить при 4 ° C)
- Opti-MEM® I восстановленная среда для сыворотки
- Соответствующие планшеты и принадлежности для тканевых культур
Для трансфекции клеток HL-60 в различных форматах тканевых культур варьируйте количество используемого реагента Lipofectamine® LTX, ДНК, клеток, среды и реагента PLUS ™ пропорционально относительной площади поверхности, как показано в таблице (количества указаны на на основание скважины).
| Сосуд для культивирования | Площадь площадь на скважину 1 | Объемная среда для посева | Клеток на лунку | Объем разбавление среда 2 | ДНК | Lipofectamine® LTX Reagent | PLUS ™ Реагент |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 96-луночный | 0,3 см 2 | 100 мкл | 2 х 10 4 | 20 мкл | 100 нг | 0.15 — 0,35 мкл | 0,1 мкл |
| 48-скважинный | 1 см 2 | 200 мкл | 5 x 10 4 | 40 мкл | 200 нг | 0,3 — 0,7 мкл | 0,2 мкл |
| 24-скважина | 2 см 2 | 500 мкл | 1 х 10 5 | 100 мкл | 500 нг | 0,75 — 1. 75 мкл | 0,5 мкл |
| 12-луночный | 4 см 2 | 1 мл | 2 х 10 5 | 200 мкл | 1 мкг | 1,5 — 3,5 мкл | 1,0 мкл |
| 6-скважинный | 10 см 2 | 2 мл | 5 x 10 5 | 500 мкл | 2,5 мкг | 3,75 — 8,75 мкл | 2.5 мкл |
1 Площадь поверхности может различаться в зависимости от производителя.
2 Если объем реагента Lipofectamine® LTX слишком мал для точного дозирования, и вы не можете объединить разведения, предварительно разбавьте реагент Lipofectamine® LTX в 10 раз в среде Opti-MEM® I с уменьшенным содержанием сыворотки и распределите в 10 раз больше количество (должно быть не менее 1,0 мкл на лунку).
Выбросьте неиспользованный разбавленный реагент Lipofectamine® LTX.
Сравнение передней нижней и верхней пластин при переломе ключицы: метаанализ | BMC Musculoskeletal Disorders
Поиск исследования
Было обнаружено восемьсот девяносто три потенциально релевантных записи.Сто шестьдесят восемь записей были исключены из-за дублирования. После проверки заголовков и аннотаций 34 записи потенциально соответствуют нашим критериям отбора. Затем с полным просмотром текста в окончательный анализ были включены 12 исследований [13, 20–30]. Схема выбора литературы представлена на рис. 1.
Рис. 1Схема отбора исследований
Характеристики исследований
Из 12 статей, включенных в наш количественный анализ, восемь исследований были ретроспективными [13, 21–24, 26, 29, 30], а другие четыре статьи были рандомизированными контролируемыми исследованиями [20, 25, 27, 28].Только одно исследование было многоцентровым [13], а остальные — одноцентровым.
Три исследования включали перелом ключицы у пожилых [22, 25, 27], а перелом ключицы середины диафиза изучался в четырех исследованиях [21, 23, 24, 26]. Кроме того, из 12 статей только в одном исследовании сообщалось о симптомах, о которых сообщали пациенты, и о субъективных оценках результатов [26]. Наконец, 954 пациента (переднее нижнее покрытие = 456, верхнее покрытие = 498) были включены в наш количественный анализ. Ни одно из полученных исследований не выявило отрасли.Информация о характеристиках исследований представлена в таблице 1.
Методологическое качество включенных исследований
Риск систематической ошибки рандомизированных контролируемых исследований
Было четыре исследования [20, 25, 27, 28], которые были зарегистрированы как рандомизированные контролируемые исследования. Только одно исследование было признано низким риском систематической ошибки [20], а другие исследования имели неясный риск систематической ошибки по причинам отсутствия достаточной информации о генерации случайной последовательности, сокрытии распределения, слепоте участников и слепоте результатов.
оценка.Кроме того, только одно исследование подробно описало генерацию случайной последовательности и маскирование распределения [20]. Кроме того, ни одно из исследований не получило поддержки со стороны каких-либо отраслей или других некоммерческих организаций. Результаты оценки риска систематической ошибки представлены на рис. 2.
Оценка риска систематической ошибки в рандомизированных контролируемых исследованиях
Методологическое качество когортных исследований
Было восемь исследований, которые были представлены как когортные исследования [20–24, 26, 29, 30].Все они были признаны качественными. В пяти исследованиях сообщалось об установлении воздействия [13, 21–23, 26], и во всех восьми исследованиях надлежащим образом определялся период наблюдения до оценки. Более того, только два исследования полностью рассматривали сопоставимость между разными группами [13, 26]. Подробная информация о риске систематической ошибки этих когортных исследований представлена в таблице 2.
Хирургические параметры
Время операции
Было проведено семь исследований ( n = 475), которые предоставили доступные данные о продолжительности операции [20–23, 25–27].Из них четыре исследования были когортными [21, 22, 25, 27], а три исследования были зарегистрированы как рандомизированные контролируемые исследования [20, 23, 26]. Результат нашего метаанализа показал, что время операции передней нижней пластинки было короче, чем верхней (SMD = -0,58, 95% ДИ от -0,97 до -0,19, P = 0,004; I 2 = 77%; Рис. 3а). Кроме того, был проведен мета-регрессионный анализ, чтобы выяснить, влияет ли средний возраст на продолжительность операции. Результат показал, что средний возраст на него не повлиял ( P = 0.48, см. Дополнительный файл 1: Рисунок S1).
Рис. 3Сравнение времени операции ( a ) и кровопотери ( b ) у пациентов, перенесших переднюю нижнюю пластину и верхнюю пластину при переломе ключицы
Кровопотеря
В шести исследованиях сообщалось об оценке кровопотери во время операции [21–23, 25–27].
Из шести исследований четыре были ретроспективными [21–23, 26]. Большинство из них не сообщали подробную информацию о характере переломов, и только в одном исследовании [26] сообщалось о классификации OTA.Результат показал, что кровопотеря в экспериментальной группе была меньше, чем в контрольной группе (SMD = -0,78, 95% ДИ от -1,15 до -0,40, P <0,0001; I 2 = 73%; рис. 3b ). Кроме того, мета-регрессионный анализ показал отсутствие влияния среднего возраста на кровопотерю ( P = 0,22, см. Дополнительный файл 1: рисунок S2).
Клинические индексы
Время объединения
В семи исследованиях с 521 пациентом сообщалось о времени объединения [20, 22–27]. Три из них [20, 25, 27] были рандомизированными контролируемыми исследованиями, но только одно исследование [20] представило подробную информацию о графике наблюдения и продемонстрировало отсутствие разницы во времени объединения между двумя группами ( P > 0.05). Однако в двух других рандомизированных контролируемых исследованиях результаты показали, что передняя нижняя пластина имела значительное преимущество во времени сращивания по сравнению с верхней пластиной ( P <0,05).
Более того, другие четыре исследования были ретроспективными и показали, что переднее нижнее покрытие превосходило верхнее покрытие, но только одно исследование показало статистически значимые различия между двумя группами.
Постоянный балл
Три исследования с участием 199 пациентов [20, 23, 24] внесли свой вклад в анализ постоянного балла, и постоянный балл в группе переднего нижнего покрытия был аналогичен таковому в группе верхнего покрытия (SMD = 0.49, 95% ДИ от -0,34 до 1,31, P = 0,25; I 2 = 87%; Рис. 4а).
Рис. 4Сравнение постоянной оценки ( a ), инфекции ( b ), несращения ( c ) и осложнений ( d ) у пациентов, перенесших переднюю нижнюю пластину и верхнюю пластину при переломе ключицы
Инфекция
Было проведено четыре исследования [13, 20, 22, 26], сообщающих об исходе инфекции, и между двумя группами не наблюдалось значительных различий (RR = 0.
89, 95% ДИ от 0,29 до 2,66, P = 0,83; I 2 = 21%; Рис. 4б).
Несращение
Данные о несращении были доступны в четырех исследованиях с 424 пациентами [13, 20, 24, 28]. Между двумя группами не было обнаружено значительных различий (ОР = 0,39, 95% ДИ от 0,15 до 1,05, P = 0,06; I 2 = 0%; рис. 4c).
Осложнения
Восемь исследований с 675 пациентами сообщили об осложнениях [13, 20, 23, 24, 26, 28–30], таких как инфекция, поломка имплантата, несращение, вырывание винта, раздражение и деформация перелома.По сравнению с верхним покрытием, переднее нижнее покрытие не было связано со значительным сокращением осложнений (RR = 0,52, 95% ДИ от 0,25 до 1,06, P = 0,07; I 2 = 82%; рис. 4d). Кроме того, мета-регрессионный анализ показал, что не наблюдалось никакой связи между продолжительностью наблюдения и осложнениями ( P = 0,16, см. Дополнительный файл 1: Рисунок S3), но средний возраст влиял на частоту осложнений ( P = 0,02, см.
Дополнительный файл 1: Рисунок S4), т.е.е., исследования с более старшим возрастом показали более высокую частоту осложнений.
Эффекты включения костного цемента KryptoniteTM при фиксации перелома с помощью техники гальваники: трупное исследование перелома плечевой кости середины диафиза
- Trung T. Le
- Ha V. Vo
- Lawrence X. Webb
- Richard K. Kunz
Первый онлайн:
Часть Протоколы IFMBE серия книг (IFMBE, том 63)Abstract
Криптонит TM Костный цемент имеет возможность включения в пластинчато-винтовой (PLT) технику фиксации внутренних переломов длинных костей.
Эффекты костного цемента как связующего звена между пластиной и винтом остаются неизвестными механиками. Целью данного исследования было сравнить биомеханические преимущества добавления костного цемента Kryptonite TM в неблокирующийся винт по сравнению с блокирующим винтом. Исследование было специально направлено на перелом середины диафиза плечевой кости. В методе PLT в этом исследовании использовалась блокирующая компрессионная пластина (LCP), на которой были получены смешанные однокортикальные и бикортикальные винты. Всего 4 пары трупной кости плечевой кости случайным образом были разделены на две группы (n = 4).Группа гибридной фиксации (HL) содержала стопорные уникортикальные винты, тогда как гибридная неблокирующая группа (HNK) использовала функцию неблокируемых винтов, включающую цемент биосовместимости в сконструированный костный имплантат. Биомеханические исследования, включая статические и динамические испытания, были выполнены на закрепленных образцах из двух групп для оценки поведения костного имплантата в условиях in vivo, с использованием сервогидравлической испытательной системы (система MTS) для определения жесткости конструкции на осевое сжатие и кручение.
Независимый выборочный парный t-критерий использовался для обнаружения значительных различий между двумя группами с 95% доверительным интервалом ( p <0,05). Группа HNK оказалась на 27 и 20% выше, чем группа HL по осевой жесткости и пределу текучести, соответственно. Предельная разрушающая нагрузка группы HNK (1199 ± 232 Н) превосходит группу HL (994 ± 239 Н). Группа HNK оказалась примерно на 23,1% выше по жесткости на кручение, чем группа HL. В ходе исследования было обнаружено статистически незначимое различие между двумя группами.В заключение было обнаружено, что костный цемент Kryptonite TM обладает как механическими, так и биологическими преимуществами, которые становятся привлекательными для внутренней фиксации длинных костей.
Ключевые слова
Ортопедическая биомеханика Фиксация внутреннего перелома длинных костей Метод PLT Криптонит TM Костный цемент Гибридная винтовая конструкция Биомеханическое исследованиеЭто предварительный просмотр содержания подписки,
войдите в, чтобы проверить доступ.
Предварительный просмотр
Невозможно отобразить предварительный просмотр.Скачать превью PDF.
Примечания
Благодарности
Мы хотели бы поблагодарить трупных доноров, которые пожертвовали часть своего тела науке, сделав возможным это исследование. Без этого большого вклада невозможно было бы провести это исследование.
Ссылки
1.
Лим В., Яривала А., Вигдеровиц С., Дрю Т. (2014) Использование костного адгезива для фиксации переломов длинных костей — биомеханическое исследование. Front Biol Life Sci 29–33
Google Scholar2.
Luong Q, Vo H, Webb L (2014) Биомеханические эффекты криптонитового костного цемента: исследование бедренной кости свиньи in vitro. Университет Мерсера, Мейкон, Джорджия
Google Scholar3.
Cristea S, Groseanu F, Predescu V, Gavrila M, Gartonea D, Papalici A (2012) Новый подход к минимально инвазивному лечению переломов. Eur J Orthop Surg Traumatol 22 (4): 283–287
CrossRefGoogle Scholar4.
Roberts J, Grindel S, Rebholz B, Wng M (2007) Биомеханическая оценка радиальной фиксации вала блокирующей пластиной: однокортикальная блокирующая фиксация по сравнению с Мизованная бикортикальная и уникортикальная фиксация в модели пилы.J Hand Surg 32 (7): 971–975
CrossRefGoogle Scholar
Информация об авторских правах
© Springer Nature Singapore Pte Ltd. 2018
Авторы и аффилированные лица
- Trung T. LeEmail автор
- Ha V. Vo
- Лоуренс X. Уэбб
- Ричард К. Кунц
- 1. Кафедра биомедицинской инженерии, Университет Мерсера, Макон, США,
- 3.Институт ортопедической травмы штата ДжорджияБольница здоровья НависентMaconUSA
- 4. Кафедра машиностроенияМерсерский университетMaconUSA
org/Organization»>, 2. Кафедра ортопедической хирургии, Школа медицины, Университет Мерсера, Макон, США,,Аудиокнига недоступна | Audible.com
Evvie Drake: начало более
- Роман
- К: Линда Холмс
- Рассказал: Джулия Уилан, Линда Холмс
- Продолжительность: 9 часов 6 минут
- Несокращенный
В сонном приморском городке в штате Мэн недавно овдовевшая Эвелет «Эвви» Дрейк редко покидает свой большой, мучительно пустой дом почти через год после гибели ее мужа в автокатастрофе.
Все в городе, даже ее лучший друг Энди, думают, что горе держит ее внутри, а Эвви не поправляет их. Тем временем в Нью-Йорке Дин Тенни, бывший питчер Высшей лиги и лучший друг детства Энди, борется с тем, что несчастные спортсмены, живущие в своих худших кошмарах, называют «ура»: он больше не может бросать прямо, и, что еще хуже, он не может понять почему.
- 3 из 5 звезд
Что-то заставляло меня слушать….
- К Каролина Девушка на 10-12-19
Посев Dictyostelium в мягкий агар
Посев Dictyostelium в мягкий агар[МАТЕРИАЛЫ] — [ИНДЕКС]
Процедура
Примечание: Эти пластины не сплошные! НЕ СКАЧАТЬ.
- Раствор агара для верхней части расплавить и охладить до 30 ° C.
-
- Сбор клеток Dicty из планшета и осадка при 2K в течение 5 минут.
-
- Аспирируйте среду и суспендируйте клетки в 10 мл HL-5, содержащего лекарство соответствующей концентрации.
-
- Добавить лекарство в охлажденный верхний агар и добавить 40 мл к суспендированным клеткам.
-
- Аккуратно перемешайте и нанесите пипеткой 5 мл раствора на чашки с агаром. Лучше всего наносить пипетку на чашки вихревым движением, чтобы раствор распределялся равномерно. НЕ пытайтесь вращать среду на чашке, наклоняя ее, потому что нижний агар выскользнет.
-
- Поместите тарелки на стол, чтобы они застыли.
-
- Оберните тарелки влажным полотенцем и оставьте на 10-14 дней.
-
- Чтобы собрать колонию, отсосите клетки из агара с помощью пипетки.
-
- После переноса в чашку они могут вырасти через несколько дней.
-
[TOP] [ИНДЕКС]
Материалы
- Верхний агар (40 мл на трансформированную чашку)
- Среда HL-5
- 0.38% агар с низкой температурой плавления
- Лучше всего делать небольшие аликвоты (100 мл)
- Чашки с агаром (на каждую трансформированную чашку необходимо 10 чашек)
- Среда HL-5
- 0,3% Бактоагар
- Соответствующий препарат (например, G418)
[TOP] [ИНДЕКС]
Купить в Интернете HL 50/150 шт.
10 мм квадратные пуговицы с покрытием для масляного хвостовика DIY швейные аксессуары для одежды пуговицы для рубашек ► AlitoolsПродажа надежных брендов.
Продавец работает на платформе более трех лет.
2% покупателей недовольны товаром от продавца.
Покупатели довольны сообщением продавца.
Товары продавца соответствуют их описанию.
Продавец отправляет быстро.
